新生小鼠肝細胞高氧損傷及其機制的初步研究.pdf

1、目的：建立高氧肝細胞損傷模型，研究高氧對肝臟細胞增殖、凋亡的影響，初步探討其作用機制。
　　方法：原代培養(yǎng)小鼠肝細胞，經過傳代培養(yǎng)后分為：對照組（空氣組，Room Air，RA）、實驗組（高氧組，Hyperoxia，HO）。對照組置于37℃、5％CO2環(huán)境培養(yǎng)；實驗組暴露于95%的氧氣中，37℃培養(yǎng)，分別干預0小時、3小時、6小時、12小時、24小時進行相應的觀察和檢測。顯微鏡下觀察細胞生長狀態(tài)以及細胞形態(tài)學的改變；CCK-8檢測

2、細胞的增殖情況；流式細胞術檢測細胞的凋亡變化；ELISA檢測細胞培養(yǎng)上清液中AST、ALT含量；并通過western blot檢測各時間點肝細胞內Caspase3的表達量；實時熒光定量PCR分析各時間點細胞內Bcl-2，Bax mRNA的表達量。
　　結果:
　　1.細胞的形態(tài)變化.培養(yǎng)24小時后，對照組各時間點肝細胞生長狀態(tài)良好，形態(tài)正常，細胞形態(tài)未見明顯改變；高氧組0h、3h、6h細胞形態(tài)學變化與對照組相比未見明顯變化。

3、12h后，細胞開始出現部分漂浮，24h后，細胞出現大片空泡樣改變，懸浮細胞明顯增多。
　　2.肝細胞增殖.對照組各時間點細胞呈現對數生長；高氧組隨著通氧時間延長細胞增殖明顯受到抑制。
　　3.ALT、AST結果.對照組各時間點肝細胞培養(yǎng)液中ALT、AST含量在正常范圍；高氧組隨著高氧時間延長，肝細胞培養(yǎng)液中ALT、AST含量逐漸增高。
　　4.流式細胞術檢測.流式檢測提示對照組細胞凋亡率無明顯變化；高氧組隨著高氧處理時

4、間的逐漸延長，肝細胞凋亡率逐漸升高。
　　5.Caspase3表達.對照組各時間點Caspase3的表達無明顯改變；高氧組隨著高氧處理時間的增加，可見Caspase3的表達量逐漸增高。
　　6.Bax、Bcl-2 mRNA的表達.實時熒光定量PCR檢測對照組各時間點Bax mRNA、Bcl-2 mRNA表達量未見明顯異常；高氧組隨著高氧處理時間的延長，可見Bax mRNA的表達量逐漸增高，Bcl-2 mRNA的表達量逐漸降低