彩色馬蹄蓮細(xì)菌性軟腐病菌的鑒定及其群體感應(yīng)淬滅的研究.pdf

1、彩色馬蹄蓮是近幾年在國(guó)內(nèi)外推出的中高檔花卉，被公認(rèn)為21世紀(jì)的“花卉之星”，但彩色馬蹄蓮細(xì)菌性軟腐病發(fā)生嚴(yán)重，且沒(méi)有理想的防治對(duì)策，極大阻礙了彩色馬蹄蓮在各地的發(fā)展。 本研究從不同品種的彩色馬蹄蓮病組織中分離到6個(gè)菌株，經(jīng)形態(tài)特征與培養(yǎng)性狀比較、生理生化測(cè)試、16S rDNA序列分析和致病性測(cè)定，結(jié)果表明6個(gè)分離物均為胡蘿卜軟腐果膠桿菌胡蘿卜亞種(Pectobacterium carotovora subsp. carotovo

2、ra).此外，信號(hào)分子檢測(cè)試驗(yàn)表明，分離菌株可產(chǎn)生并釋放出N-?；?高絲氨酸內(nèi)酯(AHLs)類信號(hào)分子。 為了防治該病害，本研究利用信號(hào)分子干擾技術(shù)，通過(guò)群體感應(yīng)淬滅酶(AttM解脂酶)，降解病原菌的N-?；呓z氨酸內(nèi)酯(AHLs)類信號(hào)分子，降低病原菌在馬蹄蓮上的致病性，從而達(dá)到防治該病害的目的。在研究中，我們一方面利用PCR技術(shù)擴(kuò)增土壤根癌農(nóng)桿菌EHA105中的attM基因，將其克隆到表達(dá)載體pUC19上，轉(zhuǎn)化宿主菌DH5

3、a，構(gòu)建了DH5a/pUCM，用pUC19中的Plac啟動(dòng)子表達(dá)attM基因；另一方面利用PCR技術(shù)，擴(kuò)增大腸桿菌JM109中的Plpp強(qiáng)啟動(dòng)子.隨后通過(guò)重疊PCR，分別將Plpp啟動(dòng)子與水稻白葉枯病菌(Xanthomonas oryzae pv.oryzae) JXOⅢ中的hrfl基因和信號(hào)分子淬滅基因attM連接，連接于表達(dá)載體pUC19，構(gòu)建工程菌JM109/pPHA，最終利用啟動(dòng)子Plpp分別表達(dá)hrfl基因扣attM基因.通過(guò)

4、煙草過(guò)敏性反應(yīng)，解酯酶AttM對(duì)病原菌信號(hào)分子降解作用的檢測(cè)、以及attM基因編碼的解酯酶AttM對(duì)彩色馬蹄蓮軟腐病菌菌體生長(zhǎng)和致病性的測(cè)定實(shí)驗(yàn)，表明：(1)自A，tumefaciens中獲得的attM基因，在Plac啟動(dòng)子下，在大腸桿菌中可以有效地表達(dá)并產(chǎn)生AttM(AHL降解酶)，降解病原菌的信號(hào)分子；(2)在表達(dá)載體pUC19中，Plpp啟動(dòng)子能同時(shí)有效表達(dá)attM基因和hrfl基因，可以引起煙草過(guò)敏性反應(yīng)，同時(shí)降解病原菌的信號(hào)分