涼血化瘀方對實(shí)驗(yàn)性肝衰竭及肝細(xì)胞凋亡作用的研究.pdf

1、目的：基于急性肝衰竭的病因病機(jī)，確立涼血化瘀大法及組方，通過藥效研究探討涼血化瘀方對急性肝衰竭模型的保護(hù)作用及抑制細(xì)胞凋亡的作用，并通過基因芯片技術(shù)闡明其抑制細(xì)胞凋亡的分子機(jī)制。
　　 理論研究：通過對祖國醫(yī)學(xué)關(guān)于黃疸的文獻(xiàn)分析，在肝臟生理病理特點(diǎn)以及對“急黃”文獻(xiàn)探源和疾病認(rèn)識(shí)的基礎(chǔ)上明確急性肝衰竭的病因?yàn)闈駸嵋叨?，基本病機(jī)為瘀熱互結(jié)，并確立了涼血化瘀為主的治療大法。涼血化瘀法是針對急性肝衰竭瘀熱相搏的病理特點(diǎn)而確立，在此基礎(chǔ)

2、上組建了涼血化瘀方，具有清熱解毒，活血化瘀，涼血養(yǎng)陰等作用。涼血化瘀方遵循中醫(yī)辨證施治的原則組方配伍，繼承了中醫(yī)藥的特點(diǎn)，并提出新的治法、方藥，具有科學(xué)性、創(chuàng)新性。
　　 實(shí)驗(yàn)研究：首先通過小鼠急性肝衰竭模型利用正交設(shè)計(jì)優(yōu)選了涼血化瘀方組成，優(yōu)選出大黃、生地和赤芍組成涼血化瘀方；進(jìn)一步通過急性肝衰竭大鼠模型探討涼血化瘀方防治急性肝損傷大鼠肝功能、凝血功能、病理損傷的影響，分別通過TUNEL半定量檢測和流式細(xì)胞儀檢測組方對肝細(xì)胞凋

3、亡的影響；利用基因芯片技術(shù)研究組方對FHF大鼠細(xì)胞凋亡基因表達(dá)的影響，探討其分子機(jī)制；最后通過小鼠急性毒性實(shí)驗(yàn)研究涼血化瘀方的毒性作用。
　　 結(jié)果：表明涼血化瘀方對急性肝損傷大鼠具有明顯的肝保護(hù)作用，可降低轉(zhuǎn)氨酶、膽紅素水平，改善凝血功能，減輕肝組織病理損傷，并且可調(diào)節(jié)細(xì)胞周期阻滯，從而抑制肝損傷大鼠肝細(xì)胞的凋亡，其機(jī)制可能是通過修復(fù)細(xì)胞周期S期的DNA復(fù)制損傷，從而抑制肝細(xì)胞凋亡；大鼠細(xì)胞凋亡基因芯片篩選發(fā)現(xiàn)涼血化瘀方能夠通

4、過基因調(diào)控達(dá)到抑制肝細(xì)胞凋亡的目的，其機(jī)制可通過調(diào)節(jié)多個(gè)細(xì)胞凋亡途徑實(shí)現(xiàn)，主要是通過下調(diào)凋亡誘導(dǎo)相關(guān)基因的表達(dá)，同時(shí)也少量上調(diào)凋亡抑制基因的表達(dá)。急性毒性實(shí)驗(yàn)未測出藥物L(fēng)D50，進(jìn)行最大給藥量測定小鼠口服最大給藥量為人用量的141.75倍，無明顯不良反應(yīng)，故認(rèn)為該藥臨床口服用荮相當(dāng)安全。
　　 通過理論研究和實(shí)驗(yàn)研究闡明了涼血化瘀方立法組方的合理性，驗(yàn)證了其對急性肝衰竭具有確切的防治作用，并闡明了其防治急性肝衰竭作用分子機(jī)制的科