外周血單個核細胞移植與骨髓干細胞動員治療心肌梗死后心力衰竭的實驗研究.pdf

1、目的：通過動物實驗觀察外周血單個核細胞(peripheral blood mononuclear cells，PBMCs)移植及重組人粒細胞集落刺激因子(recombinant human granulocytecolony-stimulating factor，rhG-CSF)動員骨髓干細胞對兔心肌梗死后心功能及梗死區(qū)周邊血管新生的影響。 方法： 以5月齡健康大耳兔為研究對象。將實驗動物隨機分為3組，每組15只。組I為

2、急性心肌梗死對照組，組II為PBMCs移植治療組，組III為rhG-CSF動員治療組。組I在結扎左冠狀動脈前降支造成心肌梗死后不予以任何治療；組II經Ficoll密度梯度離心法分離PBMCs，與Brdu共培養(yǎng)48 h以標記細胞核，在心肌梗死模型制備成功后30 min給予PBMCs移植治療；組III在心肌梗死后給予rhG-CSF30μg·kg-1·d-1皮下注射，共5天。于術前及術后1周、6周末采用超聲心動圖測定左心室舒張末內徑(left

3、 ventricular end-diastolic diameter，LVEDd)及左心室射血分數(shù)(left ventricular ejection fraction，LVEF)。所有兔在心肌梗死6周后處死，取心臟做病理切片。采用HE(蘇木素-伊紅)染色測量心肌梗死面積。免疫組織化學法觀察組II移植細胞在梗死區(qū)的生長和分化情況及3組實驗動物梗死區(qū)周邊新生毛細血管密度。 結果： 1、組II經Ficoll密度梯度離心法成

4、功從外周血分離到形態(tài)較一致的圓形單個核細胞。 2、術前超聲心動圖顯示：組I、組II和組III兔LVEDd分別為12.98±1.38 mm、12.72±1.04 mm、12.94±1.37 mm，LVEF分別為79.84±3.55％、79.80±3.59％、80.31±3.64％，各組之間差別無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。術后第1周末超聲心動圖顯示：組I、組II和組Ⅲ兔LVEDd分別為17.77±1.59 mm、16.87±1.2

5、8 mm、17.02±1.64 mm，LVEF分別為50.98±6.78％、52.14±5.61％、53.72±4.91％。3組實驗動物心梗后1周LVEF與術前比較均顯著下降(P<0.01)。術后第6周末超聲心動圖顯示：組I、組II和組Ⅲ兔LVEDd分別為17.71±1.64 mm、16.03±0.94 mm、15.97±1.52 mm，LVEF分別為50.89±8.32％、57.54±5.60％、56.43±5.77％。與急性心肌梗死

6、對照組相比，PBMCs移植和rhG-CSF動員均能縮短LVEDd(P<0.01)、提高LVEF(P<0.05)，而兩個治療組之間無統(tǒng)計學差異(P>0.05)。 3、HE染色顯示：組I、組II和組III兔的心肌梗死面積分別為37.15±2.94％、26.87±2.33％、27.47±2.13％，與急性心肌梗死對照組相比，PBMCs移植和rhG-CSF動員均能縮小梗死面積(P<0.01)。 4、鼠抗Brdu單克隆抗體染色顯示

7、：組II在細胞移植術后6周可看到壞死的心肌組織內存在Brdu標記陽性的移植細胞。主要位于局部注射部位，呈局灶狀無序生長，細胞核棕染，形態(tài)與正常心肌細胞有差異。 5、鼠抗VIII因子相關抗原單克隆抗體染色顯示：組I、組II和組III兔梗死中心區(qū)新生毛細血管密度(條/HP)分別為2.54±1.27、8.40±1.96、6.20±1.26，梗死邊緣區(qū)新生毛細血管密度分別為13.69±2.93、25.33±3.75、22.87±2.70