番茄幾個(gè)耐鹽相關(guān)基因的克隆及功能初步分析.pdf

1、土壤鹽漬化是限制作物生長(zhǎng)發(fā)育的主要非生物逆境之一。改良鹽漬土壤和提高植物的耐鹽性是現(xiàn)代農(nóng)業(yè)發(fā)展的重要目標(biāo)。本研究在前期番茄耐鹽研究中發(fā)現(xiàn)的鹽脅迫早期響應(yīng)基因的基礎(chǔ)上，克隆其全長(zhǎng)cDNA，構(gòu)建超表達(dá)和RNAi載體，轉(zhuǎn)化番茄，初步分析轉(zhuǎn)基因番茄的耐鹽性，為下一步系統(tǒng)分析關(guān)鍵基因的生物學(xué)功能及其作用的分子機(jī)理奠定基礎(chǔ)。獲得主要緯果如下：
　　 1.克隆了5個(gè)番茄(Lycopersicon esculentum Mill.)鹽脅迫早期響

2、應(yīng)基因的全長(zhǎng)cDNA，其中包括2個(gè)NAC類(lèi)基因(SlNAC1，SlNAM1)，1個(gè)鋅指類(lèi)轉(zhuǎn)錄因子(SlZF1)和2個(gè)功能未知基因(SlSRG1，SlSRG2)。序列分析表明，SlNAC1全長(zhǎng)cDNA為1327bp，編碼301個(gè)氨基酸(aa)，其GenBank登錄號(hào)(GI)為EU670750，aa比對(duì)結(jié)果表明SlNAC1與其他植物NAC類(lèi)基因的同源性較高。SlNAM1全長(zhǎng)cDNA為1218bp，完整的讀碼框共編碼296 aa，該基因與其他

3、植物的同類(lèi)基因同源性較高，其GI為EU670749。由于SlNAC1和SlNAM1都屬于同一類(lèi)轉(zhuǎn)錄因子，利用MEGA3.1軟件構(gòu)建了其分子系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)；利用SOPMA和SWISS-MODEL完成二者蛋白質(zhì)二級(jí)和三級(jí)結(jié)構(gòu)的預(yù)測(cè)，結(jié)果表明這兩個(gè)基因編碼的蛋白符合NAC類(lèi)轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)構(gòu)特征。SlZF1屬于鋅指類(lèi)轉(zhuǎn)錄因子，全長(zhǎng)cDNA為1084bp，共編碼260 aa，GI為EU670748。aa比對(duì)結(jié)果顯示該基因與其他植物同類(lèi)基因的同源性較低。

4、SlSRG1和SlSRG2是兩個(gè)全新基因，SlSRG1全長(zhǎng)cDNA為1299bp，共編碼287 aa，其GI為EU670751。SlSRG2全長(zhǎng)cDNA為1810bp，編碼499 aa，GI為EU670752。
　　 2.構(gòu)建各基因的超表達(dá)載體和RNAi載體，轉(zhuǎn)化番茄，獲得SlNAC1、SlNAM1和SlSRG2超表達(dá)載體轉(zhuǎn)化再生植株分別為13株、15株和4株。PCR檢測(cè)結(jié)果初步表明對(duì)應(yīng)T-DNA已經(jīng)整合到番茄基因組中。