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文檔簡介
1、本試驗用傳染性支氣管炎病毒(IBV)M4l毒株接種10~11日齡的SPF雞胚,在37℃培養(yǎng)36小時后冷凍,收獲的尿囊液先經(jīng)1,000xg離心30min,棄去沉淀,將含有IBV的上清39,000xg超速離心50min或者PEG8000濃縮后,加HEPES緩沖液使IBV尿囊液的最終體積為原體積的1/100,然后加入胰酶、I型卵磷脂酶C(PLC1)、神經(jīng)氨酸酶處理IBV,胰酶、I型卵磷脂酶C(PLC1)、神經(jīng)氨酸酶的終濃度分別為lunit/m
2、l、2.5units/ml、2.5units/ml,IBV懸液和酶充分混合后,置37℃水浴3個小時,期間不斷振蕩。制備好的IBV HI抗原用于IBV HA試驗,置4℃保存。 制備的IBV HI抗原在HA試驗中能夠凝集雞紅細胞,由胰酶處理IBV制備的抗原在IBV HI試驗中不具有特異性,而由PLCl、神經(jīng)氨酸酶制各的抗原在IBV HI試驗中表現(xiàn)出很強的特異性。制備的抗原與進口抗原相比較,IBV HA試驗達到很高的效價。 本
3、試驗對影響IBV HI試驗的各種因素做了比較研究,選擇l%的雞紅細胞,pH6.5 0.0lM HEPES緩沖液為稀釋液,抗原抗體在室溫作用30min,加紅細胞后4℃50min判定結果等條件,建立了監(jiān)測IBV HI抗體的HI試驗。該試驗具有很強的特異性和重復性。 用建立的IBV HI試驗對25份非免疫雞血清檢測,再通過攻毒試驗,確定了免疫臨界線為6log2。HI試驗與檢測IBV M41抗體的ELISA試劑盒檢測結果比較,HI滴度大
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