不同鈣離子通道阻滯對腎小球系膜細胞增殖的影響.pdf

1、前言：腎小球系膜由腎小球系膜細胞(glomerularmesangialcell，GMC)及腎小球內細胞外基質(extracellularmatrix，ECM)組成。腎小球系膜的病理變化是最終導致腎小球硬化，促使腎功能衰竭的基礎。系膜細胞為腎小球的固有細胞，在多種免疫和非免疫腎小球進行性損傷中均可觀察到系膜細胞的增殖。腎小球系膜細胞(GMC)數(shù)量的增加將顯著地影響著大分子物質通過系膜區(qū)，導致大分子物質在系膜區(qū)局部沉積，并由于腎小球系膜細

2、胞數(shù)量的增加，通過對腎小球毛細血管壁的擠壓作用，形成毛細血管腔的機械阻塞，降低腎小球的濾過率。如何控制腎小球系膜細胞(GMC)的增殖對于腎小球損傷的逆轉和防止腎小球疾病的慢性演變有重要意義。 關于鈣通道阻滯劑(calciumchannelblocker，CCB)的腎臟保護作用，是目前研究的熱點之一。鈣通道阻滯劑(CCB)除其血液動力學效應能夠降壓外，尚存在直接的腎臟保護機制，其機制目前尚不十分明確，其中鈣通道阻滯劑(CCB)抗系

3、膜增殖的地位在腎保護作用中可能更為重要，值得進一步研究。本實驗以大鼠腎小球系膜細胞為實驗對象，在無菌室內培養(yǎng)增殖，建立腎小球系膜細胞增殖模型，觀察不同鈣離子通道阻滯劑對腎小球系膜細胞增殖的影響。闡明鈣通道阻滯劑(CCB)保護腎臟的作用及機制。 大量研究表明，多種因素影響到系膜細胞的增殖，其中包括促進性因素及抑制性因素。研究已證實血小板源生長因子(Plateletderivedgrowthfactor，PDGF)有促進系膜細胞增殖

4、的作用，而白細胞介素-10(interleukins-10，IL-10)有抑制系膜細胞增殖的作用。目前，尚無通過研究鈣通道阻滯劑(CCB)影響IL-10和PDGF的表達來研究其對腎小球系膜細胞(GMC)增殖的影響的報道，因此，我們擬通過研究不同鈣通道阻滯劑(CCB)在不同濃度下對腎小球系膜細胞(GMC)的白細胞介素-10(IL-10)及血小板源生長因子(PDGF)表達的影響，來探討鈣通道阻滯劑(CCB)對腎小球系膜細胞(GMC)增殖的作

5、用。 實驗材料與方法 1、在無菌室中進行大鼠腎小球系膜細胞(GMC)的復蘇、傳代、培養(yǎng)。2、無菌室內取生長較好的第四代腎小球系膜細胞(GMC)，接種于六孔板，加蓋玻片。24小時后腎小球系膜細胞(GMC)長滿玻片，換成無血清培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)24小時，加入不同種類不同濃度的鈣通道阻滯劑(CCB)(每組12個孔)，同時2個對照孔不加藥，繼續(xù)培養(yǎng)24小時。 3、無菌室外依照說明書對玻片進行SABC免疫組化染色。 4

6、、應用計算機圖象分析系統(tǒng)通過顯微鏡對上述處理過的玻片進行定量分析。 結果 1、IL-10及PDGF染色陽性細胞表現(xiàn)為胞漿內程度不同地分布的棕色顆粒； 2、對于IL-10組，維拉帕米和佩爾地平濃度增大，則表達增多； 3、對于PDGF組，維拉帕米和佩爾地平濃度增大，則表達減少； 4、同一濃度維拉帕米和佩爾地平作用下，實驗組的IL-10表達顯著高于對照組(P＜0.05)； 5、同一濃度維拉帕米和

7、佩爾地平作用下，實驗組的PDGF表達顯著低于對照組(P＜0.05)； 6、相同濃度下，維拉帕米和佩爾地平之間的IL-10或PDGF表達無明顯差異(P＞0.05)； 7、同一鈣通道阻滯劑(CCB)不同濃度下，IL-10或PDGF的表達呈劑量依賴性趨勢。 結論 1、維拉帕米和佩爾地平均對大鼠腎小球系膜細胞(GMC)的PDGF表達有抑制作用，而對IL-10的表達有促進作用，提示其對腎小球系膜細胞(GMC)的增殖