DDR2與酒精性肝纖維化的關系及復方甘草酸苷的干預和治療作用.pdf

1、目的：建立酒精性肝纖維化大鼠模型，探討DDR2基因和蛋白在酒精性肝纖維化大鼠肝組織中的表達、作用及其意義，以揭示肝纖維化的發(fā)生、發(fā)展機制；同時從血清學、組織學和超微結構方面研究復方甘草酸苷對酒精性肝纖維化大鼠的干預及治療作用，為臨床治療或逆轉肝纖維化提供實驗依據。 方法79口、雄性Wistar大鼠正常飼養(yǎng)1周后隨機分為4組：模型組(48只)、干預組(11只)、吡唑組(10只)和對照組(10只)。以橄欖油拌平衡飼料喂養(yǎng)大鼠

2、的基礎上給予胃內灌注。①模型組：予酒精和吡嘩每日分2次灌胃。酒精的量(4-9.6g/Kg·d)及濃度(30％-60％)逐漸遞增，吡唑用量為25mg/Kg·d。②干預組：予酒精、吡唑和復方甘草酸苷(1片/Kg·d，每日分2次)灌胃，酒精和吡嘩的用法、用量同模型組。③對照組：予等量生理鹽水每日分2次灌胃。④吡唑組：予溶有吡唑的等量生理鹽水灌胃，吡唑的用法及用量同前。分別于灌胃4周、8周術時，各組隨機取1只處死，觀察肝組織病理變化。造模至12

3、周術模型組隨機取8只處死(即模型Ⅰ組)，干預組(9只)、吡唑組和對照組(各8只)全部處死。以自動生化分析儀檢測肝功、血脂、血糖等指標，放免檢測血清中HA、LN、PCⅢP和CⅣ含量。取肝組織標本，一部分行Masson染色、免疫組織化學染色(觀察Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型膠原在肝組織中的分布)及電鏡標本制作(觀察肝組織超微結構變化)；另一部分以熒光定量-PCR和Western blot檢測DDR2基因和蛋白表達。模型組剩余大鼠繼續(xù)灌胃，至16周術再處死6

4、只(即模型Ⅱ組)，余者隨機分為4組(每組8只)，繼續(xù)給予原有橄欖油拌平衡飼料飲食，即①治療Ⅰ組：停止酒精及吡唑灌胃，給予復方甘草酸苷治療。②治療Ⅱ組：繼續(xù)酒精及吡唑灌胃的同時給予復方甘草酸苷治療。③治療對照組：停止酒精及吡唑灌胃，即僅有普通飲食。④未治療組(即模型Ⅲ組)：繼續(xù)酒精及吡唑灌胃，不予治療。至20周末全部處死，檢測內容同上。 結果模型組①肝組織病理觀察：模型Ⅰ組可見匯管區(qū)增生、擴大，中央靜脈周圍輕度纖維組織增生；模型Ⅲ

5、組中央靜脈周圍及匯管區(qū)出現更為廣泛的纖維組織增生，相互連接成片，表現為中度纖維化；模型Ⅱ組病理改變介于兩者之間。②Masson染色圖像分析：模型Ⅰ組、Ⅱ組和Ⅲ組膠原的面密度逐漸升高，模型Ⅱ組和Ⅲ組之間比較有顯著差異(P<0.05)。③免疫組化染色分析：Ⅰ型膠原多位于匯管區(qū)和中央靜脈管壁，Ⅲ型膠原多見于中央靜脈周圍的肝細胞漿及纖維間隔處，Ⅳ型膠原主要位于Disse間隙內皮下基底膜：三種膠原隨建模時間延長均逐漸增多，以Ⅰ、Ⅳ型膠原增加為主。

6、④血清AST、HA、PCⅢ等水平隨肝損傷及纖維化程度的加重逐漸升高(P<0.05)，AST、ALP、HA、CⅣ的升高更為顯著(P<0.01)。⑤電鏡觀察：隨建模進行，模型組細胞損傷逐漸加重，膠原纖維逐漸增多。模型Ⅰ組肝細胞間及竇周出現大量交織排列的纖維束；模型Ⅱ組肝細胞呈凋亡改變；模型Ⅲ組肝細胞微絨毛明顯減少，Disse腔及細胞間充滿大量膠原纖維。⑥DDR2基因和蛋白表達也隨建模進行逐漸增加(P<0.05)。吡唑組和對照組血清及病理檢測

7、無明顯異常，DDR2僅少量表達。藥物干預或治療后的病變嚴重程度介于對照組和模型組之間。 結論 1．本實驗成功建立了酒精性肝纖維化大鼠模型，組織病理及電鏡觀察證明建模12周出現纖維化，且纖維化程度隨造模時間延長而加重。 2．隨建模進行，模型組DDR2基因和蛋白表達量逐漸增加，DDR2與Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ膠原及HA、CIV等均呈顯著正相關，其中與Ⅲ型膠原，HA、CIV關系最為密切。 3．復方甘草酸苷的干預或治療，