小鼠CX3CR1基因慢病毒過表達載體的構建及鑒定.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:構建小鼠CX3CR1基因的慢病毒過表達載體。
　　方法:采用Oligo核酸軟件對Genbank上發(fā)表的小鼠cx3cr1 mRNA序列進行分析，設計一對分別含有AgeⅠ、BamHⅠ酶切位點的CX3CR1基因上下游引物，PCR擴增出該基因的全序列cDNA，將其定向克隆入pUbi-MSC-EGFP多克隆位點，構建pUbi-MSC-CX3CR1-EGFP慢病毒表達載體。再通過氨芐青霉素抗性篩選、陽性轉化子PCR鑒定，選取正確的克隆進

2、行測序鑒定。重組慢病毒載體構建成功后，應用慢病毒包裝質粒pHelper1.0，pHelper2.0及Lipofectamine2000共轉染293T細胞獲得病毒液，通過RT-PCR檢測細胞中EGFP表達水平變化并計算病毒滴度。
　　結果:PCR及測序結果表明目的基因序列克隆正確，成功構建了含有小鼠CX3CR1基因的重組表達載體，并包裝成為慢病毒，獲得滴度為2×108TU/ml的病毒液。
　　結論:本課題成功構建慢病毒過表達載

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