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文檔簡介
1、腦水腫(brain edema)是顱腦損傷(traumatic brain injury,TBI)后所繼發(fā)的一系列神經(jīng)細胞變性、水腫以至壞死的病理過程,輕者引起神經(jīng)功能障礙,重者危及生命,是影響病人預(yù)后的重要因素之一。盡管長期以來對其進行了大量的研究,但其發(fā)生機制仍不清楚。近年來對水通道蛋白(aquaporin,AQP)家族的結(jié)構(gòu)和功能的研究發(fā)現(xiàn),AQP4在水的跨膜轉(zhuǎn)運及細胞內(nèi)外環(huán)境平衡的調(diào)節(jié)中發(fā)揮了重要作用。AQP4在中樞神經(jīng)系統(tǒng)分布
2、最為廣泛,與腦組織內(nèi)的水平衡調(diào)節(jié)關(guān)系最為密切,目前認為,AQP4的表達變化在腦外傷、腦出血、腦腫瘤性腦水腫中可能起著重要作用。燈盞花素(breviscapine)是從中藥燈盞細辛中提取的黃酮類成分,具有擴血管、活血化淤之功效,近年來表明有緩解腦水腫的作用,但具體機制不詳。本研究分為兩部分: 第一部分 大鼠液壓沖擊傷性腦水腫AQP4表達及其與腦水腫的關(guān)系。 目的:研究大鼠顱腦液壓沖擊傷后水腫腦組織中AQP4的表達變
3、化,并探討其與腦水腫之間的關(guān)系。 方法:成年雄性SD大鼠44只,體重250~300g,隨機分為2組:腦外傷組和假手術(shù)組。腦外傷組按傷后6h,12h,24h,3d,7d五個時間段分為五個亞組,每個亞組8只;假手術(shù)組8只。①腦外傷組采用美國Dixon博士建立的液壓顱腦損傷打擊器制作動物模型。②假手術(shù)組動物僅切開頭皮,造骨窗,不行液壓打擊,其余操作同腦外傷組。各組大鼠在相應(yīng)的時間點處死后,斷頭取腦。從損傷區(qū)前緣取(200±50)mg腦
4、組織應(yīng)用干濕重法測量其含水量;取挫傷灶后(斷面跨挫傷灶)約4mm厚的腦組織進行固定和石蠟包埋,獲得的組織切片行HE染色和AQP4的免疫組織化學(xué)染色。用光學(xué)顯微鏡觀察切片的染色結(jié)果,圖像處理系統(tǒng)行AQP4的免疫組化圖像分析,統(tǒng)計軟件SPSS11.5行數(shù)據(jù)處理和相關(guān)性分析。 結(jié)果:①大鼠顱腦液壓沖擊傷后6h,腦組織含水量開始增加,傷后24h達高峰(腦組織含水量%:82.54±1.89),持續(xù)至3d(80.61±0.49),然后開始下
5、降,至7d降至假手術(shù)組水平。光鏡所觀察的腦組織水腫趨勢與上述一致;②大鼠顱腦液壓沖擊傷后挫傷灶周的水腫區(qū)AQP4表達明顯多于假手術(shù)組的正常腦組織,傷后6h AQP4表達開始增加,逐漸增高至24h達高峰(平均光密度OD:0.331±0.024),持續(xù)至3d后下降(0.307±0.019),7d時接近傷后6h水平,但仍高于假手術(shù)組(P<0.05);③經(jīng)相關(guān)分析發(fā)現(xiàn):AQP4的表達和腦水腫的變化呈正相關(guān)(r=0.805,P<0.05,有統(tǒng)計學(xué)
6、意義)。 結(jié)論:①大鼠顱腦液壓沖擊傷后挫傷水腫區(qū)AQP4表達逐漸增高,24h達高峰,持續(xù)至3d后下降,7d仍高于假手術(shù)組。②大鼠顱腦液壓沖擊傷后,AQP4在腦組織中的表達和腦水腫的變化呈正相關(guān),提示AQP4在液壓沖擊傷性腦水腫的發(fā)生發(fā)展中起重要作用。 第二部分 燈盞花素對大鼠液壓沖擊傷性腦水腫AQP4表達的影響。 目的:探討大鼠顱腦液壓沖擊傷后,燈盞花素干預(yù)對AQP4在腦組織水腫中的表達變化及其對腦水腫的
7、作用,為臨床應(yīng)用燈盞花素緩解外傷后腦水腫提供理論基礎(chǔ)。 方法:成年雄性SD大鼠80只,體重250~300g,隨機分為2組:腦外傷組和干預(yù)組(燈盞花素組)。兩組按傷后6h,12h,24h,3d,7d五個時間段又分為五個亞組,每個亞組8只。①腦外傷組采用美國Dixon博士建立的液壓顱腦損傷打擊器制作動物模型。②干預(yù)組動物應(yīng)用燈盞花素治療,按照90mg/kg的標(biāo)準(zhǔn)行腹腔注射,每日1次。其余同第一部分。 結(jié)果:①干預(yù)組的大鼠腦組
8、織液壓沖擊傷后,腦水腫趨勢同腦外傷組。干預(yù)組的24h和3d兩個亞組與腦外傷組的同時間點相比,腦組織水腫明顯減輕(P<0.05),而兩組中其余亞組間的比較無差異。從切片的HE染色觀察干預(yù)組的腦水腫情況,支持以上結(jié)果。②干預(yù)組的大鼠腦組織液壓沖擊傷后,水腫區(qū)AQP4的表達趨勢同腦外傷組。干預(yù)組的24h,3d,和7d三個亞組與腦外傷組的同時間點相比,AQP4的表達明顯減少,而且其差異逐漸明顯(P=0.046,P=0.020,P<0.01)。兩
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