TXR1基因在鼻咽癌紫杉醇耐藥細(xì)胞系中的表達(dá).pdf

1、目的：
　　 1.通過(guò)研究人類鼻咽癌親本細(xì)胞與紫杉醇耐藥細(xì)胞中TXR1的表達(dá)情況，及TXR1的表達(dá)與鼻咽癌紫杉醇耐藥的相關(guān)性，探討其與紫杉醇耐藥的關(guān)系。
　　 2.篩選高效抑制TXR1基因表達(dá)的siRNA，用于鼻咽癌紫杉醇耐藥逆轉(zhuǎn)的研究。
　　 方法：
　　 1.從鼻咽癌親本及紫杉醇耐藥細(xì)胞中提取RNA及蛋白質(zhì)，用熒光定量RT-PCR、Western-blot方法分別在mRNA水平及蛋白水平來(lái)檢測(cè)鼻咽癌細(xì)

2、胞中TXR1的表達(dá)情況。
　　 2.通過(guò)lip2000載體將TXR1基因的siRNA導(dǎo)入鼻咽癌耐藥細(xì)胞，24小時(shí)后提取的蛋白質(zhì)，來(lái)檢測(cè)不同siRNA對(duì)TXR1表達(dá)的影響。
　　 結(jié)果：
　　 1.TXR1在鼻咽癌親本細(xì)胞、紫杉醇耐藥細(xì)胞中均有表達(dá)，及耐藥細(xì)胞中TXR1的含量比相對(duì)應(yīng)親本細(xì)胞中的含量高，且與耐藥指數(shù)呈正相關(guān)(R2=0.979)。
　　 2.四條TXR1基因的siRNA(siRNA TXR1-

3、22、TXR1-311、TXR1-654、Negative control FAM)，通過(guò)lip2000分別轉(zhuǎn)染鼻咽癌紫杉醇耐藥細(xì)胞HNE-2/Taxol，轉(zhuǎn)染24 h后，提取蛋白，利用Western blot技術(shù)在蛋白水平檢測(cè)不同siRNA對(duì)靶基因TXR1表達(dá)的影響，結(jié)果顯示TXR1-22對(duì)靶基因的抑制作用最強(qiáng)。
　　 3.Negative control FAM轉(zhuǎn)染的細(xì)胞在倒置熒光顯微鏡下計(jì)數(shù)，得到較高的轉(zhuǎn)染率(＞85％)，