自噬在急性胰腺炎發(fā)病過程中的作用.pdf

1、背景：
　　急性胰腺炎是外科常見的急腹癥,其發(fā)病原因尚不清楚,總體死亡率約為5％,其中重癥壞死性胰腺炎死亡率高達35~50%。目前大多研究者認為胰酶原在胰腺細胞內(nèi)非正常激活,是造成急性胰腺炎發(fā)生的原因。然而胰腺細胞內(nèi)的胰酶原又是如何激活的,目前也沒有明確闡明,有研究報道自噬參與到該過程中,可是,自噬在該過程中究竟是起到保護作用還是損害作用,尚存在很大爭議。
　　目的：
　　探索自噬在急性胰腺炎發(fā)病過程中的作用,闡述急性

2、胰腺炎的發(fā)病機制。
　　方法：
　　1.動物體內(nèi)觀察胰腺炎時自嗜的改變:采用C57小鼠腹腔間斷注射雨蛙素誘導(dǎo)急性胰腺炎模型,檢測血清淀粉酶、干濕重和胰腺組織病理變化評價胰腺炎損傷度,通過Western-blot檢測自噬特異蛋白LC3及胰腺組織透射電鏡檢測,對比正常及饑餓組小鼠,觀察自噬在胰腺炎中的變化。
　　2.建立胰腺炎細胞模型,觀察其自嗜的改變:雨蛙素刺激AR42J細胞誘導(dǎo)胰腺炎細胞模型,通過Western-blo

3、t及免疫熒光檢測自噬特異蛋白LC3,觀察雨蛙素作用于腺體細胞后自噬的改變。
　　3.雨蛙素誘導(dǎo)自噬對胰腺炎細胞模型的影響:不同濃度雨蛙素刺激胰腺細胞或者同一雨蛙素濃度刺激胰腺細胞不同時間后,觀察細胞毒性、細胞活性及凋亡等細胞狀態(tài)。
　　4.自噬對胰酶活化的影響:不同濃度雨蛙素刺激胰腺細胞或者同一雨蛙素濃度刺激胰腺細胞不同時間,并給予3甲基腺嘌呤、羥氯喹、E64D在三個不同環(huán)節(jié)抑制自噬后,采用BZiPAR(胰酶熒光底物),檢測

4、胰酶活化情況,了解胰酶活化與自嗜的關(guān)系。
　　5.觀察不同嚴重程度胰腺炎小鼠模型自嗜變化間斷腹腔注射CR,通過不同的注射次數(shù),誘導(dǎo)出不同嚴重程度的急性胰腺炎動物模型,用Western-blot檢測自噬特異蛋白LC3,觀察自噬同胰腺炎嚴重程度的關(guān)系。
　　結(jié)果：
　　1.胰腺炎動物模型自噬體數(shù)目增多,包繞酶原顆粒并降解。
　　2.雨蛙素誘導(dǎo)胰腺炎細胞模型,自噬體增加,自噬功能障礙。
　　3.雨蛙素刺激并不能直

5、接引起AR42J細胞壞死或凋亡,相反,雨蛙素反而會促進AR42J細胞增殖,這種增殖作用是可以通過抑制自噬來抑制的。
　　4.在雨蛙素的刺激下,AR42J細胞的胰酶原部分活化,酶原活化并不能隨時間的延長而累積,也不隨雨蛙素濃度增加而提高;不同環(huán)節(jié)抑制自噬,均可抑制胰酶活化。
　　5.自噬障礙程度同胰腺炎的嚴重程度呈明顯正相關(guān),當胰腺炎表現(xiàn)越重,自噬障礙越明顯。
　　結(jié)論：
　　本研究證實了自噬障礙參與急性胰腺炎胰酶