乳腺癌NDRG-1基因甲基化及5-氮雜-2′-脫氧胞苷對T47D細胞生長增殖的影響.pdf

1、摘要目的探討NDRG一1基因在乳腺癌組織中的甲基化狀態(tài)與其mRNA表達的關系，研究甲基化酶抑制劑5一氮雜一27一脫氧胞苷(5Aza一2一deoxycytidine，5Aza—CdR)對乳腺癌細胞株T47D的生長增殖及NDRG—lmRNA表達的影響。方法采用RTPCR法檢測乳腺癌及癌旁組織，乳腺良性病變組織中NDRG1基因mRNA的表達情況；甲基化特異性PCR(methylationspecificPCR，MSP)法檢測乳腺癌組織、相應癌

2、旁組織和乳腺良性病變組織NDRG1基因啟動子甲基化狀態(tài)；5Aza—CdR處理T47D細胞后，MTT法觀察細胞生長活性的變化，半定量RTPCR法檢測處理前后抑癌基因NDRG1的mRNA表達變化。結(jié)果47例癌組織中僅有20例表達NDRG—lmRNA，27例無表達，表達缺失率為574％；癌旁組織有16例表達缺失，缺失率340％，良性病變組織的NDRG—lmRNA均有表達。NDRG—l基因在47例乳腺癌組織中22例發(fā)生了甲基化，甲基化率為468

3、％，相應癌旁組織中有10例發(fā)生甲基化，甲基化率為213％，而乳腺良性病變組織均未檢測到甲基化。結(jié)果表明，甲基化率與患者年齡和病理分級無明顯相關(PO5)，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的甲基化率(667％)比無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的甲基化率(375％)高。乳腺癌組織NDRG1基因mRNA表達陰性的27例標本中有16例發(fā)生了甲基化，表達陽性的20例中6例發(fā)生了甲基化。T47D細胞分別經(jīng)25、50、100umol／L濃度的5AzaCdR處理后，與對照組相比，細胞生長受

4、到明顯抑制。半定量RT—PCR檢測發(fā)現(xiàn)，與對照組相比，不同濃度處理組細胞的NDRG—lmRNA表達增多。結(jié)論NDRG一1基因甲基化狀態(tài)與乳腺癌發(fā)生有密切關系，異常甲基化可能是引起NDRG—lmRNA表達缺失的原因。5Aza～CdR可以逆轉(zhuǎn)T47D細胞的NDRG1基因表達，恢復該基因mRNA表達的功能，從而抑制腫瘤細胞的生長。碩士研究生馬千會(生物化學與分子生物學)指導教師侯琳教授關鍵詞：乳腺腫瘤；DNA甲基化；基因表達；基因；NDRGI

5、；5一氮雜一2’一脫氧胞benigndiseaseAstheresultsshowedthattherenosignificantdifferenceinmethylationfrequencieswereseenbetweenhypermethylationstatusandhistologicalgrade(／505)Hypermethylationrateswerehigherinthelymphnodemetastasistha

6、nthatofwithoutlymphnodemetastasis(667％and375％)ThenegativeexpressionofNDRG1mRNAbreastcancertissuesweredetectedhypermethylation(16／27)，whichwassignificantlydifferenttothepositivesamples(6／20)ItwasshowedthatthegrowthofT47Dc

7、ellswasrestrictedobviouslyintheexperimentgroupscomparedwithcontrolgroupAftertreatmentwith5Aza—CdR，NDRG1mRNAexpressionswereincreased，whichwerehigherthanbeforetreatmentConclusionThepromotermethylationofNDRG一1issignificantl

8、yrelatedwiththeoccurrenceofbreastcarcinoma，anditmaycontributetothelossofNDRGlmRNAexpression5一AzaCdRmayeffectivelycausereversionofNDRG—lmRNAexpression，andtreatmentwith5AzaCdRcanreactivatetheexpressionofthegeneandinhibitth