梅花鹿鹿茸雙向電泳體系建立及蛋白質組學的研究.pdf

1、梅花鹿(Cervus nippon Temminck)位居動物藥之首,鹿茸以其神奇的藥用價值和滋補功能在中藥材領域發(fā)揮著不可代替的作用。鹿茸中成分至今不清,嚴重制約了梅花鹿產業(yè)的發(fā)展。另外,我國鹿茸質量標準體系缺失,致使鹿產品的國際競爭力逐年下降。為此,如何利用現(xiàn)代生物技術從分子水平分析鹿茸成分,建立鹿茸質量評價體系,已經成為梅花鹿產業(yè)發(fā)展急需解決的問題。本實驗篩選出鹿茸全蛋白最佳提取方法,建立了梅花鹿鹿茸雙向電泳體系;利用蛋白質組學方

2、法分析了二杠梅花鹿茸蛋白質組成,為鹿茸系列產品的深度開發(fā)提供了理論依據(jù)。
　　首先,建立梅花鹿鹿茸雙向電泳體系,篩選最適鹿茸全蛋白提取方法和電泳參數(shù),以便得到清晰的蛋白圖譜。結果表明裂解液法得到的蛋白樣品濃度較高,且樣品的雙向電泳圖譜蛋白點數(shù)量多、圓滑、分辨率高,圖譜橫豎紋少。
　　其次,利用PDQuest軟件檢測圖譜上的蛋白點,切取目的蛋白后利用MALDI-TOF/TOF質譜技術鑒定并 NCBI數(shù)據(jù)庫搜索比對,采用打分方式

3、確定蛋白鑒定是否成功。對鑒定成功的蛋白質進行功能分析,尋找與鹿茸生長有關的蛋白和具有保健作用的藥效蛋白。在蛋白圖譜上共檢測到460個蛋白點,鑒定成功177種單一蛋白。其中結構蛋白31種,具有酶活性的蛋白65種,抑制劑和激活劑5種,信號通道蛋白和分泌蛋白30種,免疫蛋白3種,與蛋白折疊有關的蛋白13種,與復制轉錄及翻譯有關的蛋白14種,血液蛋白10種,與腫瘤發(fā)生有關的蛋白6種。
　　最后,篩選得到24種與鹿茸生長發(fā)育和保健作用有關的

4、蛋白。推測中心體肌動蛋白、波形蛋白、ATP合成酶、α-烯醇化酶、丙酮酸激酶、線粒體檸檬酸合成酶、蘋果酸脫氫酶、延胡索酸水解酶、乙醇脫氫酶、肌紅蛋白、血紅蛋白、真核生物延伸因子、前體mRNA加工因子、tRNA合成酶等14種蛋白與鹿茸的生長發(fā)育有關;熱應激蛋白與鹿茸促進組織傷口愈合有關;肌腱蛋白與促進神經再生有關;鈣網蛋白、膠原蛋白、鈣調素結合蛋白、骨連接蛋白、內質網鈣結合蛋白、FK506結合蛋白等6種蛋白與鹿茸的骨化有關;含錳超氧化物歧化