CD40Ig融合蛋白對小鼠病毒性心肌炎的作用與機制.pdf

1、目的：
　　 探討CD40Ig融合蛋白(CD40Ig)對小鼠病毒性心肌炎(VMC)的治療作用及其對Thl/Th2平衡的影響。
　　 方法：
　　 選用106只4～6周齡健康雄性BALB/c小鼠，隨機分為CD40Ig組16只、病毒組40只、IgG組40只及正常對照組10只。CD40Ig組、病毒組及IgG組小鼠腹腔接種半數(shù)組織細胞感染量(TCIDso)為10-3/L的Nancy株CVB3病毒液0.15ml，正常對照組

2、小鼠腹腔接種不含病毒的等量Eagle氏液。CD40Ig組和IgG組小鼠均于接種后6小時、72小時分別腹腔注射CD40Ig0.1mg/kg及IgG0.1mg/kg。接種病毒后第7天處死所有小鼠，摘眼球取外周血，應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)檢測外周血清中IL-4及IFN-Y的含量；在無菌條件下取心臟，光鏡下觀察心肌病理變化并計算心肌組織病理積分；采用實時熒光定量PCR(RQ-PCR)法檢測心肌組織中CVB3、IL-4及IFN-Y的mR

3、NA表達；采用免疫組織化學法檢測心肌組織中CD40蛋白表達。
　　 結(jié)果：
　　 1.小鼠接種病毒后第3天陸續(xù)出現(xiàn)聳毛、懶動、拱背、進食減少或精神不振、相互撕咬等異常表現(xiàn)，體重明顯下降。第3天開始有小鼠死亡，第4～5天達高峰，6天后無死亡，且小鼠癥狀逐漸減輕。小鼠VMC的發(fā)病率為100％，光鏡下可見心肌細胞變性、壞死和心肌纖維斷裂，大量炎性細胞浸潤，呈現(xiàn)典型的病毒性心肌炎改變。
　　 2.CD40Ig組小鼠的死亡

4、率(50％)明顯低于病毒組小鼠(80％)及IgG組小鼠(77.5％)（P均<0.05），其心肌病理積分(0.85士1.01)亦明顯低于病毒組小鼠(1.78+1.05)(P<0.05)。CD40Ig組小鼠心肌組織中CVB3mRNA的表達水平(0.91+0.75)低于病毒組小鼠(3.48+2.89)(P<0.05)。
　　 3.病毒組小鼠血清IFN-Υ水平(196.30-16.89)pg/ml明顯高于正常對照組小鼠(26.20-7.

5、61)pg/ml(P<0.05)，而其IL-4水平(50.80-6.04)pg/ml明顯低于正常對照組小鼠(146.50-21.27)pg/ml(P<0.05)。CD40Ig組小鼠血清IFN-Υ水平(40.11+12.04)pg/ml明顯低于病毒組小鼠(196.30-16.89)pg/ml(P<0.05)，而其IL-4水平(84.96士23.55)pg/ml明顯高于病毒組小鼠(50.80-6.04)pg/ml(P<0.05)。
　

6、　 4.病毒組小鼠心肌組織中IFN-rmRNA水平(61.29+68.24)明顯高于正常對照組小鼠(6.61-4-15.09)(P<0.05)，兩組小鼠IL-4mRNA水平差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05）。CD40Ig組小鼠心肌組織中IL-4mRNA水平(128.58+55.89)明顯高于病毒組小鼠(1.38+1.69)(P<0.05)，兩組小鼠IFN-ΥmRNA水平差異無統(tǒng)計學意義(P>o.O5)。
　　 5.病毒組和CD4

7、0Ig組小鼠心肌組織中均有CD40蛋白表達，CD40主要表達于心肌組織中浸潤炎細胞胞膜表面，并且在心肌炎小鼠的心肌細胞胞膜/胞漿中也可見大量CD40蛋白表達。
　　 結(jié)論：
　　 1.CD40Ig可降低VMC小鼠死亡率，減輕心肌炎癥，且抑制病毒復(fù)制，表明CD40Ig對小鼠VMC具有一定的治療作用。
　　 2.VMC小鼠急性期外周血IFN-Υ水平升高，IL-4水平降低，心肌組織中IFN-ΥmRNA的表達上調(diào)，表明V