陳化烤煙煙葉表面優(yōu)勢菌株的定量檢測與誘變增效研究.pdf

1、本文以復烤后新煙和煙葉表面篩選出的優(yōu)勢菌株為試材，采用熒光定量PCR技術對不同陳化階段煙葉表面優(yōu)勢菌株的DNA拷貝數(shù)進行了定量檢測，采用微生物學、酶學和分子生物學等技術和手段對不同陳化時期煙葉的酶活性進行測定；通過向復烤后煙葉表廈噴施優(yōu)勢菌株來研究微生物制劑對煙葉品質(zhì)的影響；同時利用復合誘變劑對煙葉表面優(yōu)勢菌株進行誘變育種研究。研究結果如下： 1.煙葉表面優(yōu)勢菌株的DNA拷貝數(shù)的定量檢測及不同陳化時期烤煙煙葉中4種酶活性的動態(tài)變

2、化。結果表明，隨著陳化時間的延長，巨大芽孢桿菌的DNA拷貝數(shù)呈先升高后降低的趨勢，在陳化6個月時的每克煙葉表面所含有的巨大芽孢桿菌的DNA拷貝數(shù)最多；4種酶的活性也呈先升高后降低的趨勢，在陳化6個月時酶活性達到最大值；化學成分含量呈下降趨勢。巨大芽孢桿菌的。DNA拷貝數(shù)的變化影響煙葉中酶活性及化學成分含量的變化，表明巨大芽孢桿菌是煙葉自然陳化的內(nèi)在動力。 2.微生物制劑對復烤煙葉品質(zhì)的影響研究。采用熒光定量PCR技術對添加微生物

3、制劑的煙葉和對照的煙葉表面優(yōu)勢菌株DNA拷貝數(shù)進行定量檢測，同時，測定了不同陳化時期復烤煙葉中4種酶活性和化學成分含量及中性香氣物質(zhì)含量。通過向復烤后烤煙煙葉表面接種巨大芽孢桿菌的處理效果表明，煙葉表面優(yōu)勢菌株的DNA拷貝數(shù)明顯高于對照煙葉，4種酶的活性顯著高于對照，化學成分含量及其比值更加協(xié)調(diào)，同時發(fā)酵煙葉中大多數(shù)香氣物質(zhì)成分含量與其對照相比表現(xiàn)為明顯的增加趨勢，證明利用優(yōu)勢菌株及其生物制劑是增進陳化煙葉香氣質(zhì)量，縮短煙葉發(fā)酵周期的重

4、要途徑。 3.煙葉表面優(yōu)勢菌株的誘變育種研究。以從煙葉表面篩選得到的巨大芽孢桿菌(Bacillus megatherium)Bck為出發(fā)菌株，經(jīng)理化因子誘變處理，采用透明圈法進行初篩，即在淀粉培養(yǎng)基和蛋白培養(yǎng)基平板上挑取Hc值(透明圈直徑與菌株直徑之比)都比較大的菌株，然后對這些菌株進行搖瓶復篩，測發(fā)酵液α-淀粉酶和蛋白酶的活性，得到酶活性較高的菌株B8。其產(chǎn)生的α-淀粉酶活性是Bck的1.905倍，蛋白酶活性是Bck的2.22