胰島素樣生長因子Ⅰ對其受體在腫瘤細胞中表達調節(jié)的實驗研究.pdf

1、南京醫(yī)科大學碩士學位論文胰島素樣生長因子Ⅰ對其受體在腫瘤細胞中表達調節(jié)的實驗研究姓名：王俊宏申請學位級別：碩士專業(yè)：臨床檢驗診斷學指導教師：潘世揚章明慶20030418南京醫(yī)科火學碩士學位論文酶消化細胞，用完全1640培養(yǎng)液稀釋細胞，計數后接種于6孔細胞培養(yǎng)板，培養(yǎng)24h待細胞貼壁生長后棄去培養(yǎng)液，改用無血清的1640培養(yǎng)液(不全1640培養(yǎng)液)培養(yǎng)12h后，每孔加入一定量的rlGF—I至終濃度為20n∥ml，按0、2、4、8、16h不

2、同的時間點收集細胞。淋巴細胞采用RPMI16404％人“AB”血清直接培養(yǎng)于6孔培養(yǎng)板，培養(yǎng)24h后棄去培養(yǎng)液，改用不全1640培養(yǎng)液，培養(yǎng)12h后同樣加入rlGFI至每孔中終濃度為20ng／ml，按上述相同的時間點收集細胞。實驗同時設不加rIGFI的空白對照，在相同的時間點收集細胞。細胞收集后用Tripure提取RNA，以細胞內表達恒定的天冬氨酰合成酶基因(AS)作為內參照，采用一步法RTRCR試劑盒同時擴增AS和IGFIR基因。擴增

3、產物于2％瓊脂糖凝膠電泳，攝像后采用Kodak凝膠圖象分析軟件分析兩者表達強度，利用公式積分光密度(IOD)1GF。R／IODAs對IGFIRmRNA進行相對定量。，實驗第二部分按第一部分相同的方法培養(yǎng)淋巴細胞和A5459細胞，按終濃度為0、5、20、80、160、320ng／ml各孔加入相應的rlGFI，并根據第一部分實驗結果確定的最佳作用時間點收集細胞，提取RNA，進行RTPCR基因擴增定量分析觀察不同濃度rIGFI作用對淋巴細胞和

4、A549細胞各自IGFIRmRNA表達的影響。[結果]1淋巴細胞和A549細胞在撤除血清的無血清培養(yǎng)液中培養(yǎng)后IGFIRmRNA的轉錄均呈反應性上調，至血清撤除16h后這種作用達到平臺期。血清撤除刺激可以上調淋巴細胞IGF—IRmRNA的轉錄至4倍于基礎水平，而對于A549細胞，這種作用可以使其IGFIRmRNA升高至2倍于其基礎水平。2rIGFI的作用迅速，20ng／ml的rIGFI作用8h后即可以下調淋巴細胞IGFIRmRNA至接近