玻璃化法與化學萃取制備同種異體肌腱生物學性能的比較.pdf

1、目的:肌腱缺損在臨床中是最為多見的手外傷疾病，在其治療過程中常常需要利用異體肌腱移植來修復其不同程度的缺損，以重建失去的重要功能，最大程度地改善癥狀和恢復功能。目前對于不同程度的肌腱缺損來說可用于移植修復的材料多種多樣，根據(jù)不同的制備方法可分為自體肌腱、異體肌腱及組織工程化肌腱等，其修復方法中常用的有自體肌腱（轉位、延長及自體筋膜）和異體肌腱移植等。傳統(tǒng)方法因取材來源有限，增加新的創(chuàng)傷及影響取材位的主要功能等缺點，不能同時滿足較嚴重的肌

2、腱缺損，使人們不斷探索肌腱制備的新途徑，為肌腱缺損的治療康復提供新思路。自上世紀50年代以來，對異體肌腱的深入研究發(fā)展迅速，已取得了豐碩的成果，異體肌腱移植已經(jīng)成為目前治療肌腱缺損的主要方法，但是同時具有生物活性好、力學性能強，免疫原性低等優(yōu)點的異體肌腱是其需要解決的重點難點，移植后肌腱粘連重、力學性能弱和免疫排斥反應強烈等問題都可致其失敗。有關學者們已研究表明肌腱的抗原性主要存在于其肌腱細胞的胞膜上而肌腱的膠原纖維本身抗原性較低，如何

3、去除免疫排斥反應、防止肌腱粘連和保留移植物的相關生物學性能等問題是今后研究的重點。本實驗以來亨雞為實驗取材對象，利用玻璃化法與化學萃取法制備同種異體肌腱，通過形態(tài)組織學觀察、生物力學測試和免疫原性（外周血中CD4+、CD8+T淋巴細胞計數(shù)和CD4+/CD8+的比值）檢測等三方面指標進行分析、探討玻璃化法與化學萃取制備同種異體肌腱間的相關生物學性能，以期制備出較為理想的同種異體肌腱，為同種異體肌腱的制備及移植進一步提供有利的理論支持及臨床

4、指導。
　　 方法:本實驗選取同批孵出、同條件飼養(yǎng)6個月齡體重(2.0～2.2)Kg，平均(2.10±0.053)Kg的健康雄性白色來亨雞48只（由河北醫(yī)大動物實驗中心提供），經(jīng)編號及標記處理隨機分為三組即A（玻璃化法組）、B（化學萃取組）和C（空白對照組）三組，每組共16只。實驗采用來亨雞雙足第三足趾為手術實驗趾，于動物大腿肌肉中上部位注射1.0％的氯胺酮（15.0mg/kg）及地西泮（1.0mg/kg），待動物麻醉后將來亨雞

5、雙下肢外展俯臥位固定，進行消毒鋪單用橡皮條止血后行手術。手術過程即在掌側取Bruner's切口，切開皮膚后充分鈍性游離出屈趾淺深肌腱及腱紐，將兩腱紐于肌腱連接處橫斷取下從第一趾間關節(jié)近端到趾尖處長約5.0cm的趾深屈肌腱，將離斷肌腱經(jīng)反復沖洗去除其外膜后置于D-Hank's液(4℃)冰箱中冷藏備用。對經(jīng)過三種不同方法（玻璃化法、化學萃取和空白對照）制備的肌腱標本行Ⅰ形態(tài)組織學觀察:分別在大體觀察和光鏡觀察（HE、Masson染色）等方面

6、進行形態(tài)學觀察分析;Ⅱ生物力學測試:用生物力學試驗機(CSS-44020)對三組肌腱分別行拉伸斷裂強度(Pmax)、拉伸斷裂功耗(Wmax)和拉伸斷裂延伸率(δmax)測定;Ⅲ免疫原性檢測:經(jīng)流式細胞儀檢測外周血中CD4+、CD8+T淋巴細胞所占比例并計算CD4+/CD8+比值（將處理過的A、B、C三組肌腱兩兩組合分別移植回同種異體動物體中，于1、2、3、6周末抽取外周血進行檢測）。
　　 結果:(1)形態(tài)組織學觀察:①大體上，

7、空白對照組的肌腱是長索狀乳白色肌腱組織，質地柔軟表面較光滑，彈性韌性較良好，所有檢測肌腱均完整無缺損，三組之間未見明顯差別。②光鏡觀察，空白對照組肌腱腱細胞沿膠原纖維四周呈串珠狀縱向分布排列，數(shù)根膠原纖維緊密地相連呈束狀排列。玻璃化法組肌腱可見少許膠原纖維有斷裂跡象，膠原纖維之間間隙較空白對照組略增寬，腱細胞數(shù)與空白對照組相比略少?；瘜W萃取組肌腱膠原纖維間間隙較玻璃化組稍寬，膠原纖維存在少許斷裂，未見細胞殘留跡象;
　　 (2)

8、生物力學檢測:三組之間差異無統(tǒng)計學意義，表明三組之間未見明顯差異（P＞0.05），說明兩種方法均較好地保存了肌腱的生物力學性能;(3)免疫原性檢測，三組之間1、2周末CD4+、CD8+T淋巴細胞含量及CD4+/CD8+的比值差異有統(tǒng)計學意義，三組之間差異有顯著性(P＜0.05);3、6周末A、B組間CD4+、CD8+T淋巴細胞含量及CD4+/CD8+的比值差異無統(tǒng)計學意義，A、B組的含量及比值均低于C組，表明AB兩種方法間未見明顯差異(