小陷胸湯加味方干預動脈粥樣硬化炎性機制的理論探討和實驗研究.pdf

1、目的：應用小陷胸湯加味方干預動脈粥樣硬化炎性機制，探討動脈粥樣硬化模型大鼠“痰瘀”的病理變化。通過觀察小陷胸湯加味方對動脈粥樣硬化(atherosclerosis，AS)大鼠模型血管內(nèi)皮的保護作用、主動脈內(nèi)膜形態(tài)學的影響、血脂和血液流變學及炎性因子的作用，初步闡明中醫(yī)痰熱瘀毒之邪與炎性因子及調(diào)控機制之間的的相關(guān)性，證明小陷胸湯加味方對于動脈粥樣硬化炎性機制的干預作用。 方法： 理論探討：在廣泛收集整理歷代醫(yī)家有關(guān)論述與現(xiàn)

2、代關(guān)于AS文獻的基礎(chǔ)上，依據(jù)清熱祛痰化瘀通絡法探討AS中醫(yī)病機，指出痰脂阻絡是AS的發(fā)病基礎(chǔ)，痰瘀熱毒互結(jié)、脈道不暢是AS的主要病理環(huán)節(jié)，痰瘀化熱是AS的主要病理改變。確立“清熱祛痰、化瘀通絡”的治法，并據(jù)此制定小陷胸湯加味方劑。 實驗研究： 健康雄性SD大鼠采用高脂飲食并一次性腹腔注射維生素D3的方法建立AS大鼠模型。將雄性SD大鼠隨即分為空白對照組，模型組，辛伐他汀組，小陷胸湯加味方劑量組?？瞻讓φ战M給予普通飼料，其

3、它各組均給予高脂飼料喂養(yǎng)。辛伐他汀組和小陷胸湯加味方組在高脂飲食基礎(chǔ)上分別灌胃給予辛伐他汀和小陷胸湯加味方，空白對照組和模型組給予等體積溶媒，各組連續(xù)灌胃給藥8周。于8周末檢測大鼠血清中總膽固醇(total cholesterol，TC)、甘油三脂(triglyceride，TG)、低密度脂蛋白膽固醇(low density lipoprotein-cholesterol，LDL-C)、高密度脂蛋白膽固醇(high density li

4、poprotein-cholesterol，HDL-C)含量；血液流變學各項含量；應用光鏡觀察主動脈內(nèi)膜形態(tài)學的變化；透射電鏡觀察主動脈內(nèi)皮細胞超微結(jié)構(gòu)的改變；免疫比濁法測量高敏C反應蛋白(high-sensitive C reactiveprotein，hs-CRP)、免疫組織化學染色觀察細胞間黏附分子-1(inter-cell adhesion molecule-1,ICAM-1)、血管細胞黏附分子-1(vascular cell

5、adhesion molecule-1,VCAM-1)指標的改變；并采用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(RT-PCR)法檢測8周末主動脈勻漿中ICAM-1、VCAM-1 mRNA的表達。 結(jié)果： 1小陷胸湯加味方對AS大鼠的血脂、血流變及主動脈內(nèi)膜形態(tài)學的影響與空白對照組相比較，模型組TC、TG、LDL-C均明顯升高(P<0.05)，HDL-C明顯降低(P<0.05)；與模型組相比較，小陷胸湯加味方劑量組的總膽固醇(TC)，甘油三

6、脂(TG)，低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)，顯著降低(P<0.01)，高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)無顯著變化(P>0.05)。與模型組相比較，辛伐他汀組的總膽固醇(TC)，甘油三脂(TG)，低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)，均有不同程度地降低(P<0.01)，高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)無顯著變化(P>0.05)。小陷胸湯加味方和辛伐他汀組相比較無顯著差異(P>0.05)。 與空白對照組相比較，模型組的血液流變學各項均

7、明顯升高(P<0.01)；與模型組相比較，辛伐他汀組血液流變學各項無顯著差異(P>0.05)；與模型組相比較，小陷胸湯加味方組血液流變學各項水平顯著降低(P<0.01)。 HE染色結(jié)果顯示： 模型組：8周末主動脈內(nèi)膜可見成熟的斑塊，斑塊主要由泡沫細胞、纖維母細胞、平滑肌細胞、膠原纖維及炎性細胞等構(gòu)成，斑塊內(nèi)纖維組織明顯增生，少數(shù)已經(jīng)在其表面形成纖維層。 辛伐他汀組：8周末主動脈內(nèi)膜增厚，單位面積下內(nèi)皮細胞增多，內(nèi)

8、皮下泡沫細胞增生，斑塊較模型組減小，炎性細胞浸潤減少，病變較模型組減輕。 小陷胸湯加味方組：8周末主動脈內(nèi)膜斑塊較模型組明顯減小，甚至消失，泡沫細胞數(shù)量顯著減少，偶見炎性細胞浸潤，內(nèi)皮增生、略腫脹，病變較模型組明顯減輕。 電鏡結(jié)果顯示： 模型組：8周末主動脈內(nèi)皮細胞明顯腫脹，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)嚴重脫顆粒，線粒體數(shù)量減少，嵴減少、融合、甚至消失，吞飲小泡數(shù)量明顯減少。 辛伐他汀組：8周末主動脈內(nèi)皮細胞粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)輕度

9、擴張、不整形，有脫顆?，F(xiàn)象，線粒體嵴減少，吞飲小泡數(shù)量減少。與模型組相比較，病變減輕。 小陷胸湯加味方組：8周末主動脈內(nèi)皮細胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)明顯擴張呈池狀，有輕微脫顆?，F(xiàn)象，線粒體嵴較多、部分融合消失。與模型組相比較，病變明顯減輕。 2小陷胸湯加味方對AS大鼠心臟主動脈內(nèi)皮細胞炎性因子ICAM-1、VCAM-1、hs-CRP表達的影響：與空白對照組相比較，模型組主動脈內(nèi)皮細胞hs-CRP陽性表達強度顯著增加，ICAM-1和VCA

10、M-1陽性表達的強度和范圍亦增強(P<0.01)；辛伐他汀組、小陷胸湯加味方組與同時間模型組比較，hs-CRP、ICAM-1、VCAM-1陽性表達顯著減少(P<0.05，P<0.01)；小陷胸湯加味方組ICAM-1、VCAM-1、hs-CRP的陽性表達較辛伐他汀組減少(P<0.01)。 3小陷胸湯加味方對AS大鼠心臟主動脈內(nèi)皮細胞ICAM-1、VCAM-1 mRNA表達的影響：與空白對照組比較，模型組ICAM-1、VCAM-1 mRNA

11、轉(zhuǎn)錄水平顯著升高(P<0.01)；與模型組相比較，辛伐他汀組、小陷胸湯加味方組ICAM-1及VCAM-1 mRNA顯著降低(P<0.05，P<0.01)；小陷胸湯加味方組ICAM-1及VCAM-1 mRNA水平顯著低于辛伐他汀組(P<0.01)。 結(jié)論： 1本課題根據(jù)動脈粥樣硬化是炎性病變探討中醫(yī)的病機和治療，指出痰脂阻絡是動脈粥樣硬化的中醫(yī)的病理基礎(chǔ)，通過實驗證實動脈粥樣硬化(AS)是由于痰凝日久，終致脈道不利，氣機不

12、暢，血脈瘀阻而成脈痹。其痰瘀熱毒的病理基礎(chǔ)與動脈粥樣硬化(AS)的炎性機制及調(diào)控機制具有內(nèi)在相關(guān)性。確立“清熱祛痰、化瘀通絡”的治法并據(jù)此制定小陷胸湯加味方劑，具有理論創(chuàng)新性。 2研究表明，小陷胸湯加味方能改善主動脈內(nèi)膜形態(tài)學和內(nèi)皮細胞的超微結(jié)構(gòu)的病理改變，對血管內(nèi)皮具有保護作用；還能降低高脂損傷大鼠的總膽固醇(TC)、甘油三脂(TG)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)，降低血液流變學各指標的作用，具有降脂，改善血液黏度的作用；

13、同時小陷胸湯加味方還能夠降低血管細胞黏附分子-1(VCAM-1)、細胞間黏附分子-1(ICAM-1)mRNA的轉(zhuǎn)錄水平，進而減少血管細胞黏附分子-1(VCAM-1)、細胞間黏附分子-1(ICAM-1)蛋白的表達，還能抑制炎性因子高敏C反應蛋白(hs-CRP)的表達，發(fā)揮其抗炎的作用。綜上實驗，我們初步證明了降脂，抗血小板聚集，抗炎，抑制炎性因子基因及蛋白的表達是小陷胸湯加味方干預動脈粥樣硬化的作用機制，說明小陷胸湯加味方在抑制血管內(nèi)皮炎