microRNA-184對TGF-β2誘導人晶狀體上皮細胞上皮-間質轉分化的調控研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的：白內障術后殘留的晶狀體上皮細胞發(fā)生上皮-間質轉分化(epithelial-mesenchymal transition，EMT)是后發(fā)性白內障的主要病理改變，其具體的分子機制尤其是基因表達的調控機制尚不十分清楚。研究表明，轉化生長因子β2(transforming growth factorβ2，TGF-β2)是晶狀體上皮細胞轉分化過程最有效的誘導因子，在后發(fā)性白內障發(fā)病過程中發(fā)揮著重要作用。微小RNA(microRNAs)是一類

2、非編碼單鏈RNA，能在轉錄或翻譯水平調節(jié)靶基因的表達，從而在細胞增殖、凋亡、分化、腫瘤發(fā)生以及機體代謝等生命過程扮演了重要角色。目前，microRNAs參與EMT調控成為研究的熱點。本課題通過TGF-β2體外誘導人晶狀體上皮細胞發(fā)生EMT，采用microRNA調控技術，研究miR-184介導TGF-β2誘導人晶狀體上皮細胞EMT及其分子機制，為阻斷TGF-β2誘導的人晶狀體上皮細胞EMT生物學過程及后發(fā)性白內障的預防和治療提供了新的思路

3、。
　　方法：體外培養(yǎng)人晶狀體上皮細胞HLE-B3，使用不同濃度TGF-β2處理細胞后，采用細胞免疫熒光及western blotting法觀察和分析晶狀體上皮細胞中上皮細胞標志物E-鈣粘連蛋白（E-cadherin）和間質細胞標志物波形蛋白(vimentin)等細胞轉分化相關蛋白的變化，應用qRT-PCR法檢測TGF-β2對細胞miR-184的表達影響。建立人晶狀體上皮細胞EMT研究模型，采用脂質體介導的miRNA調控技術轉染H

4、LE-B3細胞，通過qRT-PCR法檢測轉染miR-184mimic和miR-184 inhibitor后細胞miR-184的表達。應用激光共聚焦及western blotting等方法觀察上調和下調miR-184基因對TGF-β2誘導的人晶狀體上皮細胞上皮-間質轉分化及靶基因bin3表達影響。
　　結果：外源性TGF-β2成功誘導體外培養(yǎng)人晶狀體上皮細胞發(fā)生上皮-間質轉分化。miRNA調控技術能夠在基因水平調控TGF-β2誘導的

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