兩種精子優(yōu)選法對(duì)精子DNA結(jié)構(gòu)完整性及其它因素的影響.pdf

1、目的：上游法和Pure Sperm（硅烷化硅膠懸浮液）密度梯度離心法是廣泛使用于人類輔助生殖技術(shù)中的兩大精子優(yōu)選技術(shù)，兩種技術(shù)均可優(yōu)選出高質(zhì)量的精子，但對(duì)精子DNA結(jié)構(gòu)完整性優(yōu)選的確切效果報(bào)道較少，本實(shí)驗(yàn)擬采用精子染色質(zhì)結(jié)構(gòu)分析法，對(duì)未處理精子、以及經(jīng)上游法和Pure Sperm法處理后的精子進(jìn)行DNA完整性檢測(cè)，并對(duì)精子其它參數(shù)進(jìn)行檢測(cè)，以綜合評(píng)價(jià)兩種優(yōu)選方法對(duì)正常密度精子及低密度精子的優(yōu)選效果，為不同精液選用優(yōu)選方法提供相應(yīng)實(shí)驗(yàn)依據(jù)

2、。 方法：隨機(jī)抽取2007年10月～2008年6月重慶市婦產(chǎn)科醫(yī)院遺傳與生殖研究所不育癥男性精液標(biāo)本60份，30份為正常密度精子精液（A組），其中30份為低密度精子精液B組。①上游法：將液化精液、精子培養(yǎng)液按1：2的比例混合、離心2次，后以斜放37℃溫箱中靜置30至60min，吸取上層云霧狀液體備用。②Pure Sperm法：在一試管內(nèi)依次加入80％ Pure Sperm、40％ Pure Sperm、液化精液之后離心棄上清，加

3、入培養(yǎng)液混勻、離心兩次后吸取、重懸底部精子備用。③按WHO推薦的標(biāo)準(zhǔn)方法對(duì)優(yōu)選前后兩組精液作精子密度計(jì)數(shù)，以及活率、活力的檢測(cè)。④優(yōu)選前后精子運(yùn)動(dòng)參數(shù)采用計(jì)算機(jī)輔助精液分析（CASA）進(jìn)行檢測(cè)。⑤改良巴氏染色法觀察兩組精液優(yōu)選前后精子形態(tài)及畸形率的變化。⑥精子染色質(zhì)結(jié)構(gòu)分析法（SCSA）檢測(cè)優(yōu)選前后精子DNA結(jié)構(gòu)完整性的變化。 結(jié)果：①優(yōu)選處理后精子密度明顯下降（P<0.01），以上游法下降更為顯著；精子活率、a級(jí)精子數(shù)量在優(yōu)選

4、后明顯提高（P<0.01），其中上游法比Pure Sperm法提高更明顯（P<0.01），A組精液與B組精液優(yōu)選前具有明顯差異（P<0.01），而優(yōu)選后則無(wú)差異（P>0.05）。②優(yōu)選處理后，精子平均軌跡速度（VCL）、精子向前平均直線運(yùn)動(dòng)速度（VSL）、精子平均路徑速度（VAP）、精子直線性（LIN）、精子運(yùn)動(dòng)前進(jìn)性（STA）等指標(biāo)均有明顯上升；而兩種優(yōu)選方法進(jìn)行比較，僅VCL等少數(shù)參數(shù)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；A組精液與B組精液各運(yùn)動(dòng)參數(shù)比較

5、，VCL、VSL、VAP等三項(xiàng)指標(biāo)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），其余未見(jiàn)明顯差異。③優(yōu)選后，正常形態(tài)精子數(shù)量顯著增加（P<0.01）；經(jīng)Pure Sperm法處理后小頭、梨頭、雙頭、尾部等畸形精子數(shù)量下降明顯（P<0.05）；經(jīng)上游法處理后單純空泡頭、尾部畸形精子數(shù)量減少最為明顯（P<0.05）。④被吖啶橙染成綠色（DNA結(jié)構(gòu)完整精子）的精子數(shù)量在優(yōu)選處理后明顯上升，而兩種優(yōu)選法所得結(jié)果之間進(jìn)行比較，未見(jiàn)明顯差異（P>0.05）。⑤精

6、子DNA受損可使精子密度、活率、活力下降，c級(jí)、d級(jí)精子數(shù)量明顯增多；使VCL、VSL、VAP等參數(shù)下降；使小頭、小頭合并尾部、梨形頭、錐形頭等頭部畸形以及頸部畸形精子數(shù)量增加。 結(jié)論：上游法與Pure Sperm法處理后DNA結(jié)構(gòu)完整的精子數(shù)量較優(yōu)選前明顯提高，但兩種方法之間無(wú)明顯差異；結(jié)合兩種方法對(duì)精子其它參數(shù)的不同影響可知，精子密度低或伴有大頭、雙頭畸形者，可選用Pure Sperm法進(jìn)行精子優(yōu)選，而精子密度正常者則可選用