腫瘤相關(guān)巨噬細胞對胃癌EMT的相關(guān)機制研究.pdf

1、前言
　　腹膜轉(zhuǎn)移是胃癌最常見的轉(zhuǎn)移形式之一，是導致進展期胃癌根治手術(shù)失敗的主要因素。深入研究胃癌腹膜轉(zhuǎn)移的發(fā)生、發(fā)展過程，闡明其分子病理學機制，是尋找合理、高效的治療靶點，是進一步提高中晚期胃癌術(shù)后5年生存率的根本途徑，亦可為其它惡性腫瘤腹膜轉(zhuǎn)移的防治研究提供線索和參考。
　　胃癌腹膜轉(zhuǎn)移是特殊癌細胞克隆在適宜的腹膜微環(huán)境中生長的結(jié)果。既往研究主要圍繞癌細胞開展，針對腹膜微環(huán)境改變在腹膜轉(zhuǎn)移中作用的研究甚少。
　　前

2、期實驗我們發(fā)現(xiàn)TAMs可募集并活化循環(huán)單核細胞為M2型腹腔腫瘤相關(guān)巨噬細胞(TAMs)。文獻報道，M2型TAMs可分泌多種細胞因子促進腫瘤生長，但其在腹膜轉(zhuǎn)移過程中的作用仍然未知。前期實驗發(fā)現(xiàn)M2型TAMs一方面可能誘導以腹膜間質(zhì)細胞成纖維轉(zhuǎn)化及凋亡、結(jié)締組織暴露及血管生成為主的微環(huán)境改變，因此我們推測，M2型TAMs的活化可能是腹膜轉(zhuǎn)移過程中微環(huán)境變化的核心機制。
　　EMT以上皮細胞極性的喪失及其間質(zhì)特性的獲得為主要特征，因此

3、與腫瘤細胞的原位侵襲和遠處轉(zhuǎn)移有著密切的關(guān)系。本研究擬通過體內(nèi)外實驗證實胃癌細胞可活化M2型TAMs及其比率，明確M2型TAMs誘導腹膜微環(huán)境改變及其促進腹膜轉(zhuǎn)移的作用及機制，并探討其調(diào)控癌細胞EMT的分子機制。
　　材料及方法
　　1、實驗材料:巨噬細胞系Thp，胃癌細胞系SGC-7901，BGC-823，MKN1;IL-4等巨噬細胞誘導劑，蛋白提取相關(guān)試劑;Westernblot實驗相關(guān)試劑;Transwell小室;共聚

4、焦激光顯微鏡;免疫共沉淀實驗相關(guān)試劑。
　　2、實驗方法:誘導巨噬細胞向M2型巨噬細胞分化，將M2型巨噬細胞和胃癌MKN1細胞共培養(yǎng)，測試共培養(yǎng)后胃癌MKN1細胞EMT標志性指標的改變。應用Transwell小室實驗和裸鼠實驗在體內(nèi)外檢測發(fā)生EMT后的胃癌細胞侵襲和轉(zhuǎn)移能力的變化。
　　結(jié)果
　　一、白介素成功誘導出M2型巨噬細胞
　　IL-4，IL13刺激巨噬細胞Thp，相差顯微鏡觀察懸浮細胞貼壁
　　二

5、、發(fā)現(xiàn)M2型巨噬細胞誘發(fā)胃癌細胞發(fā)生EMT改變
　　1、M2型巨噬細胞和胃癌細胞共培養(yǎng)，M2型巨噬細胞促進胃癌細胞分散生長。
　　2、M2型巨噬細胞促使胃癌細胞上皮細胞標志蛋白E-cadherin和CK8表達降低，間質(zhì)細胞標志蛋白Fibronectin表達增加。
　　三、M2型巨噬細胞促進胃癌細胞的侵襲和轉(zhuǎn)移
　　1、M2型巨噬細胞促進結(jié)腸癌細胞遷移及侵襲。
　　2、M2型巨噬細胞促進胃癌細胞在裸鼠體內(nèi)發(fā)生