孕激素核受體A、B亞型在卵巢癌中的作用及機制.pdf

1、目的：本研究通過檢測孕激素核受體A、B亞型（Progesterone receptor isoforms A and B，PR-A，PR-B）在正常輸卵管傘端(Umbrella of normal fallopian，UNF)、卵巢交界性漿液性囊腺瘤（Ovarian borderline serous cystadenoma，OBSC）、卵巢漿液性囊腺癌（Ovarian serous cystadenocarcinoma，OSC）中的表

2、達(dá)。探討其在OSC發(fā)生、發(fā)展中的作用及與臨床病理特征的關(guān)系。以及探討PR-B對卵巢癌細(xì)胞影響及與PI3K/AKT信號通路之間的關(guān)系，為卵巢癌的生物學(xué)治療提供新的理論基礎(chǔ)。
　　方法：采用免疫組織化學(xué)Elivision法檢測22例UNF、22例OBSC、52例OSC中PR-A、PR-B蛋白的表達(dá)情況。以人卵巢癌細(xì)胞OVCAR-3為研究對象：（1）設(shè)計和合成針對PR-B的siRNA。(2)用LipofectamineTM2000脂質(zhì)體

3、將PR-B FAM-siRNA轉(zhuǎn)染進(jìn)入卵巢癌細(xì)胞OVCAR-3，流式細(xì)胞儀分別檢測不同終濃度50nmol、100nmol、200nmol的轉(zhuǎn)染率。選擇轉(zhuǎn)染率高轉(zhuǎn)染濃度轉(zhuǎn)染細(xì)胞，于轉(zhuǎn)染12小時后做熒光檢測和拍照，于轉(zhuǎn)染48小時后做細(xì)胞免疫組化檢測沉默效果。（3）對照組為未轉(zhuǎn)染組：對照組1：空白組；對照組2：LY組；對照組3：LY+MPA組；對照組4：MPA組。實驗組為轉(zhuǎn)染組：實驗組1：空白組；實驗組2：LY組；實驗組3：LY+MPA組；實

4、驗組4：MPA組。（4）MTT法檢測各組細(xì)胞的存活率；AnnexinⅤ-FITC/PI雙染流式細(xì)胞術(shù)檢測各組細(xì)胞凋亡率；RT-PCR檢測各組細(xì)胞XIAP mRNA、AKT mRNA的相對表達(dá)量；Western Blot檢測各組細(xì)胞XIAP、P-AKT蛋白表達(dá)情況。
　　結(jié)果：PR-A蛋白在UNF，OBSC和OSC中陽性率分別為94.5％（21/22）、94.5％（21/22）、68.38％（34/52），三組總體相比差異有顯著性（

5、P﹤0.05）。PR-B蛋白在UNF、OBSC和OSC中陽性率分別為100％（22/22）、77.27％（17/22）、40.38％（21/52），三組總體相比差異有顯著性（P﹤0.05）。三組中PR-A/PR-B的比值總體比較差異有顯著性（P﹤0.05）。PR-A、PR-B蛋白在OSC隨著分期和組織學(xué)分級的增高而表達(dá)率逐漸下降，Ⅰ/Ⅱ期與Ⅲ/Ⅳ期比較、低級別與高級別比較，差異均有顯著性（P﹤0.05）。PR-A/PR-B比值在低級別與

6、高級別中相比，差異有顯著性（P﹤0.05）。PR-B表達(dá)在OSC有、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組間比較，差異有顯著性（P﹤0.05）。PR-A、PR-B在OSC組織中表達(dá)呈正相關(guān)（r=0.33，P﹤0.05）。
　　（1）存活率，對照組1、對照組2、對照組3、對照組4結(jié)果分別是：100%、83.43%、83.19%、82.79%，對照組4中細(xì)胞存活率最低，而對照組1最高。說明MPA與LY相似，對卵巢癌細(xì)胞有抑制增殖的作用。實驗組1、實驗組2、實

7、驗組3、實驗組4結(jié)果分別是：98.31%、82.03%、80.78%、97.89%，實驗組1與實驗組4細(xì)胞存活率均高于實驗組2和實驗組3，說明沉默PR-B后MPA抑制卵巢癌細(xì)胞增殖的作用消失。（2）凋亡率，對照組1、對照組2、對照組3、對照組4結(jié)果分別是：11.41±0.52、27.82±0.6、28.29±0.5、34.33±1.48，對照組1凋亡率最低，而對照組4凋亡率最高，說明LY和MPA都有促進(jìn)卵巢癌細(xì)胞凋亡的作用。實驗組1、實

8、驗組2、實驗組3、實驗組4結(jié)果分別是：11.56±0.49、26.86±0.76、26.69±0.63、10.47±0.53；實驗組4凋亡率最低，說明沉默PR-B后MPA促進(jìn)癌細(xì)胞凋亡的作用消失。（3）XIAP、AKT基因mRNA的表達(dá)結(jié)果。AKT mRNA在對照組1、對照組2、對照組3、對照組4結(jié)果分別是：10.81±2.23、5.12±.66、5.63±1.71、4.33±1.73；XIAP mRNA在對照組1、對照組2、對照組3、

9、對照組4結(jié)果分別是：10.56±2.73、6.08±1.61、5.61±2.39、5.01±1.34，AKT和XIAP在對照組1表達(dá)量最高，對照組4表達(dá)量最低，說明LY和MPA可抑制AKT和XIAP基因表達(dá)。AKT mRNA在實驗組1、實驗組2、實驗組3、實驗組4結(jié)果分別是：11.64±1.62、6.71±1.94、5.98±1.9、12.94±2.01，XIAP mRNA在實驗組1、實驗組2、實驗組3、實驗組4結(jié)果分別是：10.98±

10、2.1、7.06±2.7、5.2±1.98、11.29±2.18；實驗組1和實驗組4中的表達(dá)量明顯高于其他組，說明沉默PR-B后MPA不能抑制AKT和XIAPmRNA的表達(dá)。（4）P-AKT、XIAP蛋白表達(dá)結(jié)果：P-AKT蛋白在對照組1、對照組2、對照組3、對照組4結(jié)果分別是：0.8±0.023、0.66±0.019、0.61±0.013、0.69±0.022，XIAP蛋白在對照組1、對照組2、對照組3、對照組4結(jié)果分別是：0.94±

11、0.041、0.75±0.026、0.73±0.027、0.66±0.026，對照組1表達(dá)量最高，其他組均明顯減低，說明LY和MPA可抑制P-AKT和XIAP蛋白表達(dá)。P-AKT蛋白在實驗組1、實驗組2、實驗組3、實驗組4結(jié)果分別是：0.82±0.039、0.64±0.047、0.73±0.048、0.87±0.053，XIAP蛋白在實驗組1、實驗組2、實驗組3、實驗組4結(jié)果分別是：11±0.073、0.82±0.06、0.71±0.0

12、78、0.98±0.036，實驗組4中的蛋白表達(dá)明顯高于實驗組2和實驗組3，說明沉默PR-B后MPA對P-AKT和XIAP蛋白表達(dá)的抑制作用消失。
　　結(jié)論：隨著OSC惡性變的發(fā)生、發(fā)展PR-A、PR-B蛋白表達(dá)逐漸下調(diào)，而PR-B下調(diào)更為明顯，可能是卵巢組織惡性變的標(biāo)志。PR-A/PR-B比值的增大可能預(yù)示著卵巢癌分化越差。PR-B相對高表達(dá)有利于抑制OSC的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。醋酸甲羥孕酮抑制癌細(xì)胞增殖和促進(jìn)凋亡的作用機制可能是通過P