IL-1β誘導肝細胞核受體RXRα核-胞漿轉移與泛素連接酶GP78表達的相關性研究.pdf

1、研究背景及目的:
　　目前認為多種肝細胞膜轉運蛋白表達異常在膽汁淤積的分子病理機制中起到關鍵作用,而核受體維甲酸類X受體α(RXRα)則在膜轉運蛋白轉錄水平起到核心調(diào)控作用。RXRα作為核受體蛋白超家族的成員,可以與多種核受體形成異源二聚體從而廣泛參與多種靶基因轉錄活性的調(diào)控。目前研究證明在炎性因子的刺激下RXRa參與了多種膜轉運蛋白的調(diào)控,如NTCP、BSEP、MRP2及MRP3等,在膽汁淤積時發(fā)揮著重要的調(diào)節(jié)作用。不同細胞在L

2、PS及9cisRA的作用下,RXRα可以發(fā)生核-胞漿轉移,從而發(fā)揮其各種生物學功能。細胞內(nèi)RXRα的表達降低,被認為可能與泛素-蛋白酶體降解途徑(ERAD)介導的RXRα蛋白降解相關。ERAD能夠識別天然的或錯誤折疊的蛋白或多肽,并高度選擇性的進行降解,并參與某些重要蛋白質的翻譯后修飾和改造,從而在多種生理過程中發(fā)揮作用。而泛素連接酶(E3)作為蛋白酶體降解途徑中關鍵性調(diào)節(jié)介質,可能在RXRα蛋白的降解中起到重要的作用。由于膽汁淤積導致

3、肝內(nèi)毒性膽汁酸蓄積進而引起肝細胞炎性反應和損傷,在這個過程中炎性細胞因子發(fā)揮著重要作用。在LPS誘導和膽管結扎誘導的大鼠肝臟膽汁淤積中,IL-1β及TNFα的基因及蛋白水平表達均明顯升高。我們選擇了細胞因子IL-1β處理人肝癌HepG2細胞后觀察RXRα的表達及亞細胞定位變化,并對RXRα的降解過程中相關E3進行初步探索研究,旨在研究RXRα在膽汁淤積中作用的分子機制及生物學意義,對揭示膽汁淤積發(fā)病機理及尋找有效的治療措施提供線索。

4、r>　　研究方法:
　　1.IL-1β體外刺激HepG2細胞,RT-PCR檢測不同時間點HepG2細胞內(nèi)RXRα基因mRNA表達的變化;Western Blot檢測IL-1β對細胞RXRα總蛋白、核蛋白及胞漿蛋白表達的影響。運用蛋白酶體抑制劑MG132預處理細胞后再用IL-1β體外刺激HepG2細胞,Western Blot檢測IL-1β對細胞RXRα蛋白表達的影響。
　　2.IL-1β體外刺激HepG2細胞,Western

5、 Blot檢測不同時間點IL-1β對細胞泛素連接酶GP78、TEB4、HRD1蛋白表達的影響。
　　3.收集人體正常(n=12)及膽汁淤積(n=12)肝臟組織樣本,WesternBlot檢測肝組織中泛素連接酶GP78、TEB4、HRD1蛋白表達的變化。
　　結果:
　　1.Western Blot檢測發(fā)現(xiàn),IL-1β誘導HepG2細胞RXRα總蛋白表達水平降低(P<0.05),胞核、胞漿RXRα蛋白的變化符合RXRα胞

6、核-胞漿轉移現(xiàn)象的表現(xiàn)。
　　2.MG132預處理細胞后,Western Blot檢測發(fā)現(xiàn)IL-1β誘導的HepG2細胞RXRα胞核、胞漿蛋白表達改變被抑制,RXRα胞核-胞漿轉移現(xiàn)象可能被MG132抑制。
　　3.Western Blot檢測發(fā)現(xiàn),IL-1β誘導HepG2細胞gp78蛋白表達增高(P<0.05),而TEB4、HRD1蛋白表達無明顯變化。
　　4.Western Blot檢測發(fā)現(xiàn),人體淤膽肝組織中GP7