LY294002聯(lián)合奈達(dá)鉑阻斷PI3K-Akt通路對宮頸癌HeLa細(xì)胞體外生長的影響.pdf

1、目的：探討PI3K/Akt特異性抑制劑LY294002與奈達(dá)鉑(NDP)單獨(dú)及聯(lián)合應(yīng)用對宮頸癌HeLa細(xì)胞體外生長的影響以及LY294002對NDP的增敏作用，并初步探討其可能作用機(jī)制，
　　方法：（1）采用溴化四甲基偶氮唑藍(lán)（MTT）法測定不同濃度的LY294002與NDP單獨(dú)或聯(lián)合應(yīng)用對體外宮頸癌HeLa細(xì)胞的增殖抑制率。（2）Western blot免疫印跡法檢測LY294002、NDP單獨(dú)或聯(lián)合應(yīng)用對體外宮頸癌HeLa細(xì)胞

2、Bcl-2、Caspase-3、PI3K、磷酸化PI3K（p-PI3K）、Akt和磷酸化Akt（p-Akt）蛋白的表達(dá)和活性的影響。
　　結(jié)果：（1）LY294002、NDP均能抑制宮頸癌 HeLa細(xì)胞生長，隨著藥物濃度的增加，細(xì)胞抑制率明顯增加，P<0.05,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。每個藥物濃度隨著作用時間的延長，細(xì)胞抑制率逐漸增加，P<0.05，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。（2） LY294002可以增強(qiáng)HeLa細(xì)胞對NDP的敏感性。LY

3、294002、NDP單藥應(yīng)用的細(xì)胞抑制率明顯低于LY294002與NDP聯(lián)合用藥的抑制率，P<0.05，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。運(yùn)用公式計(jì)算聯(lián)合指數(shù)，提示聯(lián)合作用時，具有協(xié)同性。（3）Western Blot法分析結(jié)果表明：LY294002、NDP均能下調(diào)HeLa細(xì)胞Bcl-2蛋白表達(dá)，同時上調(diào)Caspase-3蛋白表達(dá)。且與LY294002、NDP單藥應(yīng)用比較，LY294002與NDP聯(lián)合應(yīng)用Bcl-2蛋白的表達(dá)率有顯著降低，而Caspa

4、se-3蛋白表達(dá)率顯著增高。（4）PI3K、Akt蛋白在宮頸癌HeLa細(xì)胞內(nèi)均有表達(dá)，LY294002作用后能明顯抑制HeLa細(xì)胞內(nèi)p-PI3K、p-AKT的蛋白表達(dá)。
　　結(jié)論：
　?。?）PI3K特異性抑制劑LY294002及NDP均明顯抑制宮頸癌HeLa細(xì)胞的體外增殖，且這種作用呈濃度及時間依賴性。
　?。?）隨著LY294002濃度的增加，HeLa細(xì)胞對NDP的敏感性逐漸增強(qiáng)，提示LY294002對NDP具有協(xié)