SIVmac239和SHIV-,CHN19P4-新方法感染中國恒河猴及艾滋病疫苗免疫效果評價.pdf

1、目前，艾滋病已成為影響人類健康的最嚴重的傳染性疾病之一。世界各國嚴峻的流行形勢迫切需要研制出安全有效的預防性艾滋病疫苗。疫苗的安全性、有效性以及免疫策略需要在合適的動物模型中進行評價。
　　 SIVmac239恒河猴模型是經(jīng)典的艾滋病動物模型，在國外已經(jīng)進行了二十幾年的探索研究。我國科學家對SIVmac239中國恒河猴模型研究也有二十幾年的時間，但研究多側(cè)重于靜脈、粘膜的一次大量攻毒基礎(chǔ)之上。本研究參照HIV性傳播自然感染劑量范

2、圍，選用SIVmac239連續(xù)升高的3種劑量直腸粘膜途徑感染兩只恒河猴，采取多種方法進行病毒血癥和免疫反應特點分析。實驗結(jié)果表明兩只中國恒河猴經(jīng)2×101TCID50和2×102 TCID50病毒滴度2次攻擊45d后，經(jīng)檢測均未建立系統(tǒng)性感染，病毒特異性免疫反應均為陰性；第3次2×103TCID50病毒滴度攻擊后，M296猴表現(xiàn)出典型的系統(tǒng)性感染特點，并誘導特異性免疫反應。通過模擬HIV性傳播感染特點進行恒河猴直腸粘膜感染研究，探索引起

3、系統(tǒng)性感染的病毒閾值水平與機體病毒、免疫學之間相關(guān)性，為我國艾滋病粘膜疫苗等生物制劑有效性評價提供新的模型構(gòu)建思路。
　　 包含中國HIV-1 CRF07_BC主要流行株基因CCR5嗜性的致病性SHIV/中國恒河猴艾滋病模型在基于中國HIV-1主要流行株設計的艾滋病疫苗免疫保護效果評價中可以發(fā)揮非常重要的作用。SHIVCHN19感染性分子克隆是由SIVmac239的5’-PVP-1質(zhì)粒與3’-pCHN19質(zhì)粒構(gòu)建而成。之后經(jīng)過連

4、續(xù)四代傳代形成毒力增強的SHIVCHN19P4。本研究將SHIVCHN19P4在中國恒河猴體內(nèi)快速傳代。經(jīng)過兩代連續(xù)猴體傳代后，通過病毒載量和外周血CD4+T淋巴細胞計數(shù)分析發(fā)現(xiàn)SHIVCHN19P4病毒在猴體傳代過程中表現(xiàn)出病毒毒力進一步增強的特點。然后我們將毒力表現(xiàn)最強的恒河猴G0603V病毒分離出來，進行序列分析，尋找其毒力增強的原因，并制備出SHIVCHN19P4中國恒河猴傳代適應株，命名為SHIVCHN19P5。本研究課題為進

5、一步建立C亞型SHIV強毒株/中國恒河猴模型奠定了良好的實驗基礎(chǔ)，為研究C亞型HIV-1流行株致病特點以及預防性粘膜疫苗和殺微生物劑的有效性評價提供了數(shù)據(jù)支持。
　　 本課題評價了兩株由香港大學研制的包含SIVmac239病毒的gag，pol和env基因的DNA疫苗和非復制性痘苗天壇減毒株艾滋病疫苗（MVTT-SIVgpe）。本課題采用MVTT-SIVgpe/pSIVgpe聯(lián)合免疫的策略免疫4只中國恒河猴，并選用4只中國恒河猴做

6、為空載體對照組。免疫后，檢測細胞和體液免疫反應。HIV特異性結(jié)合抗體滴度和IFN-γ分泌性T細胞免疫反應分別采用ELISA和ELISPOT方法分析。實驗結(jié)果表明該聯(lián)合免疫疫苗IFN-γ分泌性T細胞免疫反應較強，但是HIV特異性結(jié)合抗體滴度較弱。該疫苗用于研究艾滋病疫苗在恒河猴機體內(nèi)的作用機理和作用效果，對揭示人用疫苗的作用機理以及艾滋病的發(fā)病機制有重要的借鑒意義。
　　 為了研究CD8+T細胞體內(nèi)對病毒作用，本研究將進入艾滋病感

7、染潛伏期的四只恒河猴使用人鼠嵌合單克隆抗體cM-T807敲除體內(nèi)CD8+T細胞，之后通過病毒載量、CD8+T細胞絕對數(shù)、IFN-γ，分泌性T細胞免疫反應等研究敲除后CD8+T細胞敲除與病毒載量走勢的關(guān)系以及敲除前后IFN-γ分泌性T細胞免疫反應的差異。結(jié)果表明在CD8+T細胞敲除后21d四只恒河猴病毒載量均發(fā)生了反彈，但峰值較低，持續(xù)時間也較短，敲除前后IFN-γ分泌性T細胞免疫反應差異較小。本研究使用CD8+T細胞體內(nèi)敲除抗體能夠選擇

8、性去除中國恒河猴艾滋病模型的CD8+T細胞，有助于我們研究病毒感染的急性期和慢病毒感染過程中病毒的復制和病毒的致病機制。
　　 綜上所述，本課題通過模擬HIV性傳播感染特點進行恒河猴直腸粘膜感染研究，確認了HIV性傳播過程中的病毒劑量效應關(guān)系；通過SHIVCHN19P4在中國恒河猴體內(nèi)適應性傳代研究發(fā)現(xiàn)病毒毒力增強，并制備出SHIVCHN19P4中國恒河猴傳代適應株-SHIVCHN19P5；通過MVTT-SIVgpe/pSIVg