多肽藥物促進傷口愈合動物實驗.pdf

1、自然界中存在著大量具有生物學活性的多肽物質(zhì)，多肽作為生物體內(nèi)的重要組成部分之一，它們在機體的生理與病理生理過程中發(fā)揮著重要的調(diào)節(jié)作用。小分子多肽作為藥物具有其獨特的優(yōu)勢：分子量小，無免疫原性；結(jié)構(gòu)簡單，副作用??；分子小，易于合成，生產(chǎn)成本相對較低；產(chǎn)品純度高，無致熱原等問題。因此，目前在世界范圍內(nèi)應(yīng)用活性多肽作為藥物、疫苗、酶抑制劑、導向藥物及藥物先導藥己成為研究的熱點課題。 在表皮組織修復愈合過程中，表皮細胞的遷移、增殖和分泌

2、受到多種細胞因子的調(diào)節(jié)。細胞因子在創(chuàng)傷愈合中產(chǎn)生三種生物效應(yīng)，即趨化作用、合成分泌作用和增殖分化作用。此外，還通過直接與間接方式控制細胞外基質(zhì)（膠原、透明質(zhì)酸等）的合成與分解代謝。細胞因子的發(fā)現(xiàn)及其研究的日益深入，為治愈創(chuàng)傷，加速愈合提供了新的途徑。 近年來，隨著對表皮生長因子（EGF）研究的不斷深入，發(fā)現(xiàn)表皮生長因子除了具有對多種組織來源的表皮細胞有很強的促分裂功能之外，還具有使表皮干細胞再分布的作用。我們知道表皮這些潛在的干

3、細胞是表皮再上皮化的細胞來源。在正常活體, 表皮干細胞位于表皮基底層，約占基底層細胞的1％～10％。而經(jīng)過EGF治療后，在表皮中接近終末分化程度的棘層或顆粒層出現(xiàn)表皮干細胞異位獨特現(xiàn)象。 安基奧101是在皮膚創(chuàng)傷愈合過程中發(fā)現(xiàn)具有活性的小分子多肽，屬于胸腺素β家族，序列為NH2-MSDKPDLSEVETFDK SKLKKTNTEEKNTLPSKETIQQEKEYNQRS-COOH，含有45個氨基酸，分子量約為5305，采用固相合

4、成法合成，并用液相色譜（HPLC）和質(zhì)譜（MS）分析法，符合安基奧101序列及分子量。 本實驗采用制作動物模型，用直徑為2毫米的至傷器，在背部制成直徑為2毫米的標準傷口，實驗時間為2周，并在第4、7、10天測量傷口直徑大小，觀察傷口愈合時間，取傷口及附近正常皮膚做HE染色病理檢查及β1整合素、K19免疫組化。 實驗結(jié)果，對第4、7、10天測量傷口大小及傷口愈合時間進行比較，安基奧101多次給藥組、陽性對照組傷口愈合明顯快

5、于安基奧101單次給藥組、陰性對照組，分別做統(tǒng)計學比較，有顯著性差異，而安基奧101多次給藥組和陽性對照組兩組比較，無明顯差異，安基奧101單次給藥組和陰性對照組比較，無明顯差異，說明安基奧101多次給藥對傷口愈合有明顯促進作用，作用效果與rhEHF相似，而安基奧101單次給藥對傷口愈合無明顯作用，與陰性對照組沒有統(tǒng)計學差異。對傷口及附近正常皮膚做HE染色病理比較，安基奧101多次給藥組、陽性對照組上皮化明顯高于陰性對照組、安基奧101

6、單次給藥組，分別做統(tǒng)計學比較，有顯著性差異，而安基奧101多次給藥組和陽性對照組比較，無明顯差異，安基奧101單次給藥組和陰性對照組比較，無明顯差異，說明安基奧101多次給藥有明顯促上皮化作用，而安基奧101單次給藥則無促上皮化作用。對傷口及附近正常皮膚做β1整合素、K19免疫組化，陰性對照組、安基奧101單次給藥組在表皮未見β1、K19陽性細胞表達，陽性對照組和安基奧101多次給藥組在表皮基底層可見β1、K19陽性細胞表達，在表皮棘層

7、和顆粒層也可見散在β1、K19陽性細胞表達，說明安基奧101多次給藥也具有使表皮干細胞再分布的作用，而有部分安基奧101多次給藥組在表皮棘層和顆粒層未見β1、K19陽性細胞表達，原因尚不明確；安基奧101單次給藥不具有使表皮干細胞再分布的作用。 安基奧101有使表皮干細胞再分布作用，在表皮中接近終末分化程度的棘層或顆粒層出現(xiàn)表皮干細胞異位獨特現(xiàn)象，考慮作用機制與rhEGF類似，可能有以下原因：（1）表皮干細胞產(chǎn)生了“跳躍”，即伴

8、隨著機體創(chuàng)傷修復信號的啟動，表皮干細胞快速地向表皮上層遷移，能動地參與創(chuàng)面的修復；（2）由于機體創(chuàng)傷修復的緊迫性，雖然表皮干細胞脫離表皮基底層進入分化狀態(tài)而形成了短暫擴充細胞，但這種暫時增殖細胞的狀態(tài)尚屬幼年期，仍表達表皮干細胞的某些特征；（3）創(chuàng)緣的皮膚附屬器（如毛囊）內(nèi)的干細胞接到了創(chuàng)傷修復的指令，啟動毛囊隆突內(nèi)的毛囊干細胞-表皮的通路，參與修復。安基奧101有明顯促進傷口愈合、促上皮化增生作用，考慮其作用機制除了具有使表皮干細胞再