聽(tīng)神經(jīng)病隨訪觀察及致病基因篩查研究.pdf

1、聽(tīng)神經(jīng)病是一種臨床表現(xiàn)較為特殊的疾病，主要的聽(tīng)力學(xué)特征包括聽(tīng)性腦干反應(yīng)缺失或嚴(yán)重異常，耳聲發(fā)射正常，鐙骨肌反射消失或閾值升高，純音聽(tīng)力圖多以低頻聽(tīng)閾損失為主?；颊叩闹饕髟V是言語(yǔ)分辨率差而無(wú)法與人正常交流。聽(tīng)神經(jīng)病與一般的感音神經(jīng)性聾的顯著差異，正引起越來(lái)越多的關(guān)注。但是對(duì)于此病的病因、發(fā)病機(jī)制及疾病的轉(zhuǎn)歸仍不明確。因此分析認(rèn)識(shí)疾病的發(fā)展與轉(zhuǎn)歸，有利于深入了解該病并指導(dǎo)患者生活。另外，我們希望通過(guò)基因水平的研究以獲得該病的致病基因，從而

2、明確該病的發(fā)病機(jī)理，尋找可能的治療手段。
　　試驗(yàn)方法和結(jié)果
　　1、聽(tīng)神經(jīng)病患者隨訪研究
　　通過(guò)對(duì)2001年1月至2009年7月間就診于我科的聽(tīng)神經(jīng)病患者進(jìn)行隨訪調(diào)查，分析聽(tīng)神經(jīng)病患者的純音聽(tīng)閾測(cè)試、聲導(dǎo)抗測(cè)試、ABR、DPOAE、ENG及VEMP等的變化特征。隨訪者均為非綜合征型聽(tīng)神經(jīng)病患者，共74人，男性32人，女性42人，發(fā)病年齡3～33歲，平均16.69±4.42歲?；颊呒円袈?tīng)閾損失以低頻損失為主（70.1

3、％），左右耳間無(wú)差別。隨訪1～9年，平均3.74±1.96年，患者純音聽(tīng)閾水平在隨訪期內(nèi)無(wú)明顯差異，無(wú)向高頻發(fā)展的趨勢(shì)。隨著患者病程和隨訪期的延長(zhǎng)，言語(yǔ)識(shí)別率為0的患者比例有顯著的增加。隨訪期內(nèi)鐙骨肌反射閾值與引出率無(wú)明顯變化。隨訪期間患者DPOAE無(wú)變化，并無(wú)繼發(fā)性耳聲發(fā)射消失的表現(xiàn)。隨訪期間患者ENG異常耳數(shù)量、VEMP閾值及引出率均無(wú)明顯變化，并無(wú)加重趨勢(shì)。總之，隨訪期內(nèi)聽(tīng)神經(jīng)病患者的聽(tīng)力學(xué)表現(xiàn)基本無(wú)變化，未觀察到明顯加重或減輕。

4、對(duì)于該病的發(fā)展與轉(zhuǎn)歸，仍需擴(kuò)大隨訪人群并延長(zhǎng)隨訪期，以全面了解該病的自然病程。
　　2、聽(tīng)神經(jīng)病患者OTOF基因與PJVK基因突變篩查
　　OTOF基因與PJVK基因是隱性遺傳性耳聾的致病基因，目前有證據(jù)顯示其突變與聽(tīng)神經(jīng)病相關(guān)。為了明確散發(fā)聽(tīng)神經(jīng)病患者上述兩種基因的突變情況，我們進(jìn)行了全外顯子測(cè)序篩查。70名受檢者中，OTOF基因共檢出10種影響氨基酸編碼的突變，其中4種未見(jiàn)報(bào)道，包括4023+1G>A，G368R，N72

5、7S，A809D。PJVK基因共檢出3種影響氨基酸編碼的突變，其中2種未見(jiàn)報(bào)道，包括1059+2A>C，R183Q。但是檢出的突變均為單雜合突變，尚不能確定其突變形式是該患者的致病原因。
　　3、聽(tīng)神經(jīng)病遺傳家系的收集與整理
　　臨床中我們注意總結(jié)和收集耳聾家系以供基因研究。我們共收集到7個(gè)聽(tīng)神經(jīng)病家系。其中5個(gè)為常染色體顯性遺傳的非綜合癥性聽(tīng)神經(jīng)病家系，2個(gè)是伴有外周神經(jīng)病的X染色連鎖的隱性遺傳性聽(tīng)神經(jīng)病家系。為我們后期的

6、研究奠定了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。
　　4、X染色體連鎖的隱性遺傳性聽(tīng)神經(jīng)病家系的致病基因篩查
　　我們對(duì)一個(gè)臨床資料較為完整的X染色體連鎖的隱性遺傳性聽(tīng)神經(jīng)病家系進(jìn)行了全外顯子捕獲測(cè)序，逐步縮小檢測(cè)范圍，最終通過(guò)家系連鎖確定了該家系的致病基因?yàn)锳IF（apoptosisinducefactor，凋亡誘導(dǎo)因子）基因，突變?yōu)殄e(cuò)義突變S314N。
　　5、AIF基因在聽(tīng)神經(jīng)病患者中的突變篩查
　　我們對(duì)70名散發(fā)的聽(tīng)神經(jīng)病患者進(jìn)

7、行了AIF基因的全外顯子測(cè)序篩查，在男患者中共檢出9種錯(cuò)義突變，包括L191P、I287T、Q332H、G360R、R422W、A440V、P475L、E558V、D559G，及一個(gè)位于5‘UTR區(qū)的純合突變，均未見(jiàn)報(bào)道。我們認(rèn)為AIF基因在聽(tīng)神經(jīng)病患者中的高突變率可能提示其在聽(tīng)神經(jīng)病致病過(guò)程中扮演著重要的角色。
　　6、AIF基因的定位與表達(dá)研究。
　　我們通過(guò)RT-PCR及組織化學(xué)染色的方法，對(duì)AIF基因在大鼠內(nèi)耳的表達(dá)

8、做了初步研究，發(fā)現(xiàn)AIF廣泛分布在Corti器、內(nèi)外毛細(xì)胞、基底膜、螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞及血管紋等處。同時(shí)新生大鼠與成年大鼠耳蝸基底膜AIFmRNA的表達(dá)量無(wú)明顯差異。結(jié)果初步提示我們，AIF在內(nèi)耳中廣泛表達(dá)，其功能異常可能影響聲音信號(hào)的轉(zhuǎn)化與傳導(dǎo)。我們?nèi)孕柽M(jìn)一步進(jìn)行功能研究以明確其致病機(jī)理。
　　總之，我們對(duì)聽(tīng)神經(jīng)病的了解還比較少，通過(guò)本研究，我們初步探明了聽(tīng)神經(jīng)病的自然轉(zhuǎn)歸，了解了隱性遺傳性聽(tīng)神經(jīng)病相關(guān)基因OTOF與PJVK基因在散