抗生素M331抗銅綠假單胞菌的作用及對其體外形成生物被膜影響的研究.pdf

1、目的:本課題通過對銅綠假單胞菌臨床株和標(biāo)準(zhǔn)株的生物學(xué)特性、其生物被膜形態(tài)學(xué)的研究,探討了不同濃度的M331以及其聯(lián)合大環(huán)內(nèi)酯類抗生素對銅綠假單胞菌及其形成生物被膜的影響,以探討新的治療銅綠假單胞菌感染及它的生物被膜的方法；并初步探討了藥物M331的藥物毒性。
　　 方法:應(yīng)用四區(qū)劃線法分離純化了菌株；通過對比其對細(xì)胞的粘附能力,來觀察其毒力；采用改良的組織培養(yǎng)平板法,建立了臨床株P(guān)A1和標(biāo)準(zhǔn)株P(guān)A27853生物被膜的模型；應(yīng)用微

2、量稀釋法,測定了不同藥物及其聯(lián)合用藥對PA1、P43、PA5、PA2059、PA27853的MIC值,應(yīng)用微量稀釋法,測定了PA1、PA2059的MBEC值；應(yīng)用MTT法測定了不同劑量M331及聯(lián)合用藥后PA1、PA27853生物被膜中的存活細(xì)菌數(shù)；應(yīng)用銀染法及掃描電鏡鑒定生物被膜,并觀察了不同劑量M331及其聯(lián)合用藥后PA1、PA27853的超微結(jié)構(gòu),對其菌落形態(tài)學(xué)進(jìn)行描述。
　　 結(jié)果:臨床株和標(biāo)準(zhǔn)株不同菌株的產(chǎn)綠色素的情況

3、不一；PA1、PA27853對Hela細(xì)胞的粘附性實驗顯示,PA1、PA27853對Hela細(xì)胞的粘附類型為彌散性粘附,且臨床株P(guān)A1比標(biāo)準(zhǔn)株P(guān)A27853更易于粘附Hela細(xì)胞。銀染法快速鑒定結(jié)果顯示,都可見濃密黑染交織分布的物質(zhì),其間隙中可見聚集的短桿狀菌體。掃描電鏡觀察,銅綠假單胞菌呈短桿狀,聚集成團(tuán),為濃厚的粘液樣物質(zhì)緊密包繞,菌體之間相互以粘稠的纖維狀粘液絲相連。MTT法測定不同劑量M331及聯(lián)合羅紅霉素PA1、PA27853

4、生物被膜中存活的細(xì)菌數(shù),結(jié)果顯示,羅紅霉素對M331有增效作用。應(yīng)用銀染法、掃描電鏡觀察不同劑量M331和聯(lián)合羅紅霉素處理的PA1、PA27853的生物被膜,可見隨著M331及羅紅霉素的劑量增大,PA1、PA27853生物被膜中的細(xì)菌逐漸被清除,細(xì)菌量逐漸減少。
　　 結(jié)論:通過前期的實驗研究,發(fā)現(xiàn)從貴州省耕土中分離的某種放線菌能產(chǎn)生一種抗生素,經(jīng)前期的實驗證實其對銅綠假單胞菌療效較確定,對其它常見菌種無效,我們將此代謝產(chǎn)物命名

5、為M331。本課題通過研究發(fā)現(xiàn),不同抗菌藥物對PA1、PA27853的浮游菌的殺菌活性存在明顯差異,M331的療效比慶大霉素弱,與多粘菌素B相當(dāng),強(qiáng)于羧芐青霉素。使用大環(huán)內(nèi)酯類抗生素能顯著增強(qiáng)M331的抗菌活性,酶抑制劑也能增強(qiáng)β-內(nèi)酰胺酶類抗生素的抗菌活性。國內(nèi)外研究發(fā)現(xiàn),14、15元環(huán)的大環(huán)內(nèi)酯類抗生素能抑制細(xì)菌藻酸鹽的合成,其作用機(jī)制可能是抑制藻酸鹽合成的關(guān)鍵酶--甘露糖脫氫酶(GMD)的活性,與其它藥物聯(lián)合應(yīng)用能夠抑制細(xì)菌生物被