動物性食品源大腸桿菌對抗生素與消毒劑耐藥性及PFGE分型研究.pdf

1、大腸桿菌(Escherichia coli)是國際公認的食品衛(wèi)生和耐藥性監(jiān)測重要的指示菌，可以通過食物鏈傳播，并感染人和動物，導致腹瀉，感染致病性較強的血清型時還能致命?？股厥穷A(yù)防和治療大腸桿菌等病原菌感染的重要手段，近年來由于抗生素的廣泛及不合理使用，食源性大腸桿菌對抗生素耐藥性增強。為了降低傳染的發(fā)生、阻止抗生素耐藥菌的進一步危害，環(huán)境消毒控制成為控制病原菌傳播的主要措施，目前，季銨鹽類(Quaternary Ammonium C

2、ompounds，QACs)消毒劑已被廣泛用于養(yǎng)殖、食品加工等環(huán)境的消毒，然而消毒劑使用的增多是否會導致細菌對消毒劑的耐藥也成為眾多學者關(guān)心的問題，已有報道發(fā)現(xiàn)抗生素可以與季銨鹽類消毒劑共同耐藥，但目前國內(nèi)關(guān)于動物性食品源大腸桿菌對消毒劑耐藥及與抗生素共同耐藥的研究報道較少。
　　本研究從四川省部分市縣采集肉類樣品，分離大腸桿菌，并利用形態(tài)學、生理生化及16S rDNA鑒定。按照CLSI推薦方法及判斷標準，應(yīng)用藥敏紙片法測定大腸桿

3、菌對11種不同抗生素的敏感性，應(yīng)用瓊脂稀釋法測定大腸桿菌對季銨鹽類消毒劑(QACs)的MIC值，并應(yīng)用PCR方法檢測QACs耐藥基因和1型整合子，分析大腸桿菌對消毒劑耐藥性與抗生素耐藥表型之間的關(guān)系，對含有可移動遺傳元件介導的QACs耐藥基因的菌株P(guān)FGE分型，并選擇部分菌株進行接合試驗。本研究主要開展了三個方面的研究:
　　1動物性食品源大腸桿菌的分離及對抗生素的耐藥性
　　2009-2013年從四川省不同地區(qū)采集肉類樣品

4、328份包括:豬肉203份，牛肉66份，雞肉59份，分離培養(yǎng)基分離，16S rDNA鑒定出大腸桿菌255株(77.74％):雞肉50株(84.75％)，豬肉161株(79.31％)，牛肉44株(66.67％)。采用紙片擴散法對11種常用藥敏紙片進行藥敏試驗，結(jié)果顯示:218株(85.49％)大腸桿菌對11種抗生素表現(xiàn)出不同程度的耐藥性，特別是氨芐西林，磺胺甲惡唑，四環(huán)素。多重耐藥分析結(jié)果顯示，255株動物性食品源大腸桿菌中，126株(4

5、9.41％)大腸桿菌為多重耐藥菌株，各種耐藥譜型中，3重耐藥菌株所占比例最大為13.73％(n=35)，其次為5重耐藥為13.33％(n=34)，優(yōu)勢耐藥譜型分別為S3(n=21); S3-TET(n=18); TET(n=16);AMP-S3-TET(n=13)。
　　2動物性食品源性大腸桿菌對QACs消毒劑的耐藥性
　　瓊脂稀釋法測定255株大腸桿菌對三種季銨鹽消毒劑的MIC值，PCR擴增10種季銨鹽類消毒劑耐藥基因，檢

6、測255株大腸桿菌的1型整合子的流行情況，分析其與大腸桿菌多重耐藥的關(guān)系，選取部分可移動遺傳元件介導的消毒劑耐藥基因陽性菌株開展接合試驗。結(jié)果表明各消毒劑MIC范圍是:CPC，8-512 mg/L; CTAB，16-512mg/L; BC，16-1024mg/L; DDAC4-1024 mg/L。QACs耐藥基因檢出率為:ydgE(87％;221/255),mdfA(85％;218/255),sugE(c)(83％;212/255),y

7、dgF(80％;203/255),emrE(78％;200/255),qacE△1(20％;50/255),qacF(18％;46/255),sugE(p)(7％;7/255),未檢出qacE、qacG。供試大腸桿菌1型整合子檢出率較低，255株大腸桿菌僅66株檢出(25.88％)。接合試驗證實qacF,qacE△1，sugE(P)的傳播性。所有抗生素耐藥菌中qacF檢出率顯著高于抗生素敏感菌(p＜0.05)，豬肉源中大腸桿菌中qacE

8、△1基因與抗生素耐藥顯著相關(guān)(p＜0.05）。
　　3質(zhì)粒介導的消毒劑耐藥基因陽性菌株的PFGE分型
　　對含有sugE(p)、qacE△1或qacF的96株大腸桿菌進行PFGE分型。結(jié)果表明96株大腸桿菌可以分為13個型73個亞型，耐藥大腸桿菌來源與肉類采集地點（不同超市）相關(guān)，部分同源性較高的菌株中，抗生素耐藥譜型相似。部分菌株消毒劑耐藥基因與PFGE譜型相關(guān)，A、B型大腸桿菌中主要基因組合為emrE-mdfA-sugE

9、(c)-ydgE-ydgF-qacF，C型中mdfA-sugE(c)-ydgE-ydgF-qacE△1基因組合流行率較高。
　　本研究發(fā)現(xiàn)動物性食品源大腸桿菌污染情況較嚴重，菌株對抗生素的耐藥率及多重耐藥率相對較低，大腸桿菌對季銨鹽類消毒劑具有較高MIC值，消毒劑耐藥基因檢出率高，消毒劑耐藥基因qacE△1、qacF與抗生素耐藥具有相關(guān)性。耐藥大腸桿菌來源與肉類采集地點相關(guān)，應(yīng)加強對動物性食品源大腸桿菌污染及耐藥性監(jiān)測，并需注重肉