Ala-Gln對(duì)斷奶仔豬體液免疫及腸黏膜細(xì)胞免疫的調(diào)控作用.pdf

1、本研究以21日齡早期斷奶仔豬為試驗(yàn)對(duì)象，研究了Ala-Gln對(duì)仔豬體液免疫及腸黏膜細(xì)胞免疫的調(diào)節(jié)作用，并以仔豬小腸上皮細(xì)胞(IPEC-1)為模型探討了Ala-Gln對(duì)仔豬小腸上皮細(xì)胞增殖與凋亡的調(diào)控機(jī)制。
　　試驗(yàn)一:Ala-Gln對(duì)斷奶仔豬外周血細(xì)胞因子、免疫器官細(xì)胞因子及T淋巴細(xì)胞亞群的調(diào)節(jié)作用
　　本試驗(yàn)采用單因子試驗(yàn)設(shè)計(jì)，選用遺傳背景和體重相近（6.7±0.9kg）、21±2日齡斷奶的長(zhǎng)白×大白去勢(shì)仔豬100頭，按完

2、全隨機(jī)區(qū)組設(shè)計(jì)分為4處理，每個(gè)處理設(shè)5個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)5頭仔豬。各處理仔豬飼糧為在基礎(chǔ)飼糧基礎(chǔ)上分別添加0％、0.15％、0.30％和0.45％Ala-Gln。試驗(yàn)期為21d。于試驗(yàn)第7、14、21d從每個(gè)重復(fù)隨機(jī)選取1頭接近平均體重的仔豬進(jìn)行前腔靜脈采血并屠宰。采集外周血液及免疫器官用于測(cè)定細(xì)胞因子含量和外周T淋巴細(xì)胞亞群分布表達(dá)以探討Ala-Gln對(duì)斷奶仔豬體液免疫的影響。結(jié)果顯示，(1)飼糧中添加0.15％、0.30％Ala-Gl

3、n提高了仔豬斷奶后第7d血液中ALB、TP、免疫球蛋白IgA、IgG的含量(P＜0.05)，降低了COR的含量(P＜0.05);0.30％Ala-Gln組仔豬在斷奶后第14d TP、IgA、IgG含量也顯著高于對(duì)照組（P＜0.05），COR的含量則低于對(duì)照組(P＜0.05);(2)飼糧中添加不同水平的Ala-Gln均可顯著降低血清中細(xì)胞因子IL-6水平(P＜0.05);斷奶后第7、14d，0.30％Ala-Gln顯著提高了仔豬IL-2、

4、TNF-α水平，0.15％Ala-Gln顯著降低IL-5的水平(P＜0.05);在斷奶后第21d，IL-5水平隨Ala-Gln添加量呈二次曲線變化規(guī)律，0.45％Ala-Gln組IL-5顯著高于對(duì)照組(P＜0.05)。此外，0.30％Ala-Gln使仔豬脾臟、胸腺中IL-10水平大幅提高(P＜0.05)，而各Ala-Gln添加組脾臟、胸腺中的TNF-α水平顯著低于對(duì)照組(P＜0.05)。(3)Ala-Gln可在一定程度上增加外周血T淋巴

5、細(xì)胞亞群CD4+表達(dá)并降低CD8+的表達(dá)。各試驗(yàn)處理組仔豬在斷奶后第7dCD4+/CD8+比值顯著高于對(duì)照組(P＜0.05)。0.45％Ala-Gln在斷奶后第14、21天顯著提高仔豬CD4+/CD8+比值(P＜0.05)。由此可知，Ala-Gln可提高仔豬血液中免疫球蛋白、抗炎因子的水平同時(shí)降低炎性因子的水平，增強(qiáng)仔豬的免疫功能，進(jìn)而緩解早期斷奶應(yīng)激。
　　試驗(yàn)二:Ala-Gln對(duì)斷奶仔豬小腸黏膜固有層SIgA漿細(xì)胞數(shù)量、SIg

6、A及黏膜中細(xì)胞因子的含量的影響
　　試驗(yàn)設(shè)計(jì)同試驗(yàn)一。于試驗(yàn)第7、14、21d，從每個(gè)重復(fù)選取1頭接近平均體重的仔豬屠宰。采集小腸腸段、小腸黏膜以分析小腸黏膜固有層SIgA漿細(xì)胞表達(dá)及 SIgA、黏膜中細(xì)胞因子的含量。結(jié)果顯示，(1)飼糧中添加0.15％～0.45％Ala-Gln均顯著提高仔豬斷奶后第7、14、21d十二指腸以及空腸黏膜固有層SIgA漿細(xì)胞數(shù)量(P＜0.05)，尤其是0.30％Ala-Gln組仔豬在斷奶第14d空腸

7、SIgA漿細(xì)胞數(shù)比對(duì)照組增加22.6％(P＜0.05)。在回腸段，0.30％Ala-Gln顯著提高斷奶后第7、14d仔豬SIgA細(xì)胞數(shù)(P＜0.05)。(2)斷奶仔豬空腸黏膜SIgA含量隨著Ala-Gln添加量呈二次曲線增長(zhǎng)規(guī)律。在斷奶后第7天，0.30％Ala-Gln組仔豬SIgA含量與對(duì)照組相比極顯著提高了70.4％(P＜0.01)。在斷奶后第14、21天，0.15％Ala-Gln和0.30％Ala-Gln顯著提高了SIgA的分泌量

8、(P＜0.05)。(3)飼糧中Ala-Gln添加0.15％和0.30％可顯著性提高仔豬早期斷奶后第7天黏膜細(xì)胞因子IL-2、IL-5的水平（P＜0.05）;隨著日糧中Ala-Gln添加量的增加，各組IL-6的含量呈線性增長(zhǎng)趨勢(shì)，且顯著高于對(duì)照組(P＜0.05)。黏膜TNF-α含量在試驗(yàn)第7、21d隨Ala-Gln添加呈線性降低變化，以0.30％和0.45％添加組最低(P＜0.05)。由此說(shuō)明，飼糧中添加適量Ala-Gln可提高腸黏膜固有

9、層SIgA漿細(xì)胞數(shù)量，黏膜SIgA分泌量及IL-2、IL-6含量，降低TNF-α水平，增強(qiáng)黏膜免疫應(yīng)答，提高斷奶仔豬腸道黏膜細(xì)胞免疫。
　　試驗(yàn)三:Ala-Gln對(duì)仔豬小腸上皮細(xì)胞凋亡的影響
　　本試驗(yàn)以仔豬小腸上皮細(xì)胞(IPEC-1)為體外細(xì)胞模型，在營(yíng)養(yǎng)性缺乏Gln條件下體外培養(yǎng)IPEC-1細(xì)胞以模擬斷奶應(yīng)激。經(jīng)含0、0.25、0.5、1.0、2.0、4.0mM Ala-Gln的培養(yǎng)基處理IPEC-1后，用流式細(xì)胞儀分析

10、測(cè)定IPEC-1的凋亡率，采用Western Blot方法檢測(cè)Caspase-3激活產(chǎn)物和抑制凋亡蛋白Bcl-2的表達(dá)量，以探討Ala-Gln對(duì)仔豬小腸上皮細(xì)胞凋亡的影響及其作用機(jī)理。結(jié)果顯示，(1)各Ala-Gln處理組中IPEC-1細(xì)胞凋亡率均顯著低于對(duì)照組(P＜0.05)。隨著Ala-Gln添加量的增加，IPEC-1細(xì)胞凋亡率表現(xiàn)為先降低后增加的規(guī)律，當(dāng)Ala-Gln的濃度為1.0mM和2.0mM時(shí)，IPEC-1細(xì)胞凋亡率最低，顯