響應鹽脅迫的黃瓜韌皮部蛋白質組學研究.pdf

1、本試驗以鹽敏感黃瓜品種‘津優(yōu)1號’和較耐鹽的品種‘新泰密刺’為材料,采用水培的方法,通過在營養(yǎng)液中添加終濃度為75 mM的NaCl對植株進行鹽脅迫處理,研究了鹽脅迫下黃瓜韌皮部滲出液的蛋白質組。在脅迫第3d時收集植株的韌皮部液,首先通過 SDS-PAGE電泳檢測韌皮部液中提取的蛋白純度,確認得到較高純度蛋白用于下一步試驗,然后采用iTRAQ定量技術分析鹽脅迫下的黃瓜韌皮部液中蛋白質并進行生物信息學分析,得到差異表達的蛋白,并從 mRNA

2、水平對部分差異蛋白進行驗證。同時,利用熒光定量 PCR技術對選取的差異蛋白基因在葉片和根系不同鹽脅迫時間點的表達進行分析。主要結果如下:
　　1.利用切割滲出的方法成功收集到黃瓜植株韌皮部液,SDS-PAGE電泳檢測表明收集的韌皮部液中提取的蛋白純度較高,完全滿足iTRAQ定量分析試驗要求。通過iTRAQ定量鑒定到共745個蛋白質。其中分別在‘津優(yōu)1號’和‘新泰密刺’中鑒定到69和65個特異蛋白在鹽脅迫處理下差異表達。這些差異表達

3、的蛋白中只有4個上調蛋白與16個下調蛋白是‘津優(yōu)1號’和‘新泰密刺’所共有的,更多的差異表達蛋白是不同的黃瓜品種所特有的。對這些差異蛋白質的功能進行分類:其中28個差異蛋白為主要與代謝相關蛋白;17個與蛋白轉運相關;7個與能源和運輸相關;24個與脅迫和防御相關;8個與植物生長發(fā)育相關;13個與信號轉導和轉錄調節(jié)相關;14個雜蛋白。
　　2.利用實時熒光定量技術對鹽逆境應答蛋白的基因在黃瓜韌皮部滲出液中的表達進行研究發(fā)現(xiàn),在黃瓜品種

4、‘津優(yōu)1號’和‘新泰密刺’韌皮部滲出液中9個蛋白中分別有67％、45%的蛋白基因在mRNA水平的表達趨勢與蛋白水平表達趨勢相同。Cs5、Cs6、Cs7在鹽脅迫的‘津優(yōu)1號’韌皮部滲出液中蛋白水平的表達是上調的,與mRNA水平表達趨勢相反;‘新泰密刺’中Cs7在mRNA水平與蛋白水平相反,而Cs2、Cs4、Cs5、Cs6在mRNA水平表達趨勢不顯著,但在蛋白水平顯著。對鹽逆境應答蛋白基因在黃瓜葉片和根系的表達分析表明:鹽脅迫也誘導了鹽逆境