人牙周膜成纖維細胞和牙齦成纖維細胞藥物轉運模型的建立及相關機制的初步研究.pdf

1、抗生素在口腔頜面部感染的治療中發(fā)揮著重要作用。研究發(fā)現(xiàn)牙周致病菌可侵入牙齦上皮細胞和成纖維細胞內，以逃避宿主的防御機制；有些抗生素可在上述細胞內及齦溝液中積聚，其濃度高于相應血藥濃度，而有些藥物不能在細胞內積聚，胞內藥物濃度相近或低于相應血藥濃度，這使得抗生素在應用中益發(fā)復雜。研究細胞對不同抗生素攝取機制對指導臨床用藥及提高藥效的發(fā)揮具有重要作用。牙周細胞對藥物的攝取及跨細胞轉運是人工種植牙給藥系統(tǒng)以及牙根管給藥系統(tǒng)理論的重要基礎之一，

2、本課題組前期研究已發(fā)現(xiàn)牙周組織細胞可選擇性攝取部分常用抗生素，為進一步探討這兩種給藥系統(tǒng)的可行性及規(guī)律，本文對牙周細胞攝取抗生素的機制進行了初步研究，并建立和驗證人牙周膜和牙齦成纖維細胞藥物轉運模型。全文分兩大部分。
　　 第一部分人牙周膜和牙齦成纖維細胞攝取抗生素機制的初步研究
　　 實驗一人牙周膜和牙齦成纖維細胞對甲硝唑及替硝唑攝取機制的研究
　　 目的：研究人牙周膜成纖維細胞(HPDLF)及人牙齦成纖維細胞

3、(HGF)對甲硝唑和替硝唑的攝取，探討攝取的方式及通過牙根管給藥的可行性。
　　 材料與方法：采用高效液相色譜法研究HPDLF及HGF分別與甲硝唑及替硝唑孵育后不同時間細胞內藥物的濃度，細胞內藥物濃度與細胞外藥物濃度的關系，以及溫度、pH和轉運抑制劑丙磺舒和腺嘌呤對細胞攝取甲硝唑和替硝唑的影響。
　　 結果：孵育3min后HPDLF及HGF胞內甲硝唑和替硝唑濃度即可達到細胞外水平；細胞內甲硝唑和替硝唑濃度隨著細胞外甲硝唑

4、和替硝唑濃度的增加而呈線性增加；溫度、pH和轉運抑制劑對HPDLF及HGF攝取甲硝唑和替硝唑無明顯影響。
　　 結論：HPDLF及HGF可快速攝取甲硝唑和替硝唑，證實了根管給藥的可行性；甲硝唑及替硝唑通過簡單擴散方式進入HPDLF及HGF細胞內；甲硝唑與替硝唑在進入HPDLF及HGF的動力學之間沒有顯著差別，同時HPDLF與HGF間在攝取甲硝唑及替硝唑時也沒有差別。
　　 實驗二有機離子轉運體mRNA在人牙齦成纖維細胞上

5、的表達
　　 目的：檢測有機陽離子轉運家族及有機陰離子轉運家族在HGF的表達，并探討其在人牙齦成纖維細胞主動轉運中的作用。
　　 方法：采用RT—PCR法檢測有機陽離子轉運體有機陰離子轉運體家族成員的mRNA在HGF上的表達。
　　 結果：HGF有OCT1、OCT2、OCTN1及OAT1—4 mRNA的表達。
　　 結論：證實了HGF存在有機陽離子轉運體及有機陰離子轉運體的推測。
　　 第二部分人

6、牙周膜及牙齦成纖維細胞藥物轉運模型的建立及對部分口腔常用抗生素的跨細胞轉運
　　 實驗一人牙周膜及牙齦成纖維細胞藥物轉運模型的建立與驗證
　　 目的：借鑒Caco-2細胞模型，建立HPDLF及HGF藥物轉運模型，用以研究牙根管給藥系統(tǒng)及人工種植體牙給藥系統(tǒng)中牙周細胞對藥物的轉運。
　　 方法：將原代培養(yǎng)的HPDLF及HGF分別接種到Transwell聚酯濾膜上，連續(xù)以光學顯微鏡觀察細胞的生長排列情況，測定跨膜電阻

7、，并以滲漏標志物熒光素鈉等指標進行檢測。
　　 結果：HPDLF及HGF接種1周后細胞基本匯合，到2周時細胞連接緊密且完整，細胞呈復層生長，跨膜電阻分別達56.14±7.43及57.34±7.62Ω·cm-2，經熒光素鈉孵育30分鐘檢測細胞旁滲漏小于1％。
　　 結論：所建模型在2周后細胞排列情況可模擬體內牙周膜和牙齦生理狀態(tài)，且符合模型建立要求，可作為研究牙周細胞轉運藥物的體外模型。
　　 實驗二人牙周膜成纖維

8、細胞及牙齦成纖維細胞藥物轉運模型對甲硝唑、替硝唑、米諾環(huán)素及頭孢噻肟鈉的轉運
　　 目的：利用HPDLF及HGF藥物轉運模型研究HPDLF及HGF對于部分口腔常用抗生素的跨細胞轉運，探討對不同藥物的轉運規(guī)律。
　　 方法：在建立的HPDLF及HGF藥物轉運模型，以高效液相色譜法測定HPDLF及HGF對甲硝唑等藥物的跨細胞轉運。
　　 結果：甲硝唑、替硝唑及米諾環(huán)素經7—8min即可完全被HPDLF及HGF跨細胞轉