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1、目的:根據(jù)國內(nèi)外近年對凋亡途徑的研究成果,進一步研究大黃素(EM)對大鼠肝癌細胞CBRH-7919細胞凋亡及凋亡誘導(dǎo)因子(AIF)和核酸內(nèi)切酶G(EndoG)mRNA表達的影響,探討大黃素的抗癌機制。 方法: (1)體外細胞培養(yǎng):常規(guī)培養(yǎng)大鼠肝癌細胞CBRH-7919; (2)應(yīng)用MTT法檢測不同濃度大黃素對大鼠肝癌細胞系CBRH-7919增殖抑制作用,并計算其不同時間點的IC50值,根據(jù)MTT干預(yù)結(jié)果選擇干預(yù)條
2、件; (3)實驗分空白對照組、Caspase抑制劑Z-VAD-FMK干預(yù)組、大黃素組、大黃素+Z-VAD-FMK組四組; (4)應(yīng)用原位末端標記法(TUNEL)檢測各組細胞凋亡情況。 (5)采用實時熒光定量PCR(QT-PCR)法檢測各組AIF、EndoG mRNA的表達情況。 結(jié)果:MTT法檢測顯示大黃素能抑制大鼠CBRH-7919細胞的增殖,其48h時IC50值為44.8μmol/L,且呈劑量依賴效應(yīng)
3、關(guān)系和時間依賴效應(yīng)關(guān)系。用大黃素(48h IC50濃度)、大黃素聯(lián)合Caspase抑制劑處理CBRH-7919細胞后光鏡下可見明顯的凋亡細胞;TUNEL法檢測示凋亡細胞數(shù)隨處理時間延長而增多。實時熒光定量PCR檢測示大黃素及大黃素+Z-VAD-FMK組細胞AIF、EndoG mRNA表達上調(diào),與空白組比,差異有顯著性。 結(jié)論:大黃素對大鼠肝癌CBRH-7919細胞的增殖抑制作用呈劑量與時間依賴性;大黃素能上調(diào)AIF、EndoG
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