ipt基因表達載體的構建及其水稻遺傳轉化研究.pdf

1、植物葉片衰老是葉片發(fā)育的最后階段。葉片衰老過程有著很重要的實際價值，因為當葉片衰老進行時，植物的營養(yǎng)成分可以轉運到植物其它的生長部位，使營養(yǎng)物質得以再利用。然而在農業(yè)生產上，葉片衰老會帶來不利影響，它將極大地限制作物產量潛力的發(fā)揮。
　　水稻生育后期葉片過早衰老，導致同化能力降低，制約著水稻產量的進一步提高，細胞分裂素是一種重要的延緩植物葉片衰老進程的植物激素，ipt基因是細胞分裂素生物合成的關鍵酶基因，將葉片衰老特異表達的啟動子

2、PSAG12與ipt基因融合構成嵌合基因后再導入水稻中，可以特異性地提高轉基因水稻體內的細胞分裂素水平，從而有效地延緩水稻葉片的衰老，為提高水稻的產量探索一條新的途徑。
　　本研究克隆了ipt基因及啟動子PSAG12，并構建了適合水稻轉化的表達載體，通過農桿菌介導法將其導入水稻并進行相應的分子檢測，主要研究結果如下：
　　1．以根癌土壤農桿菌C58 Ti質粒為模板，采取PCR方法，克隆了ipt基因，序列測定結果表明，插入片段

3、全長723bp，包含了該基因完整的編碼閱讀框，與發(fā)表的ipt基因核苷酸同源性為100％（AE009419）。
　　2．根據已知的PSAG12啟動子序列設計引物，成功從擬南芥基因組中克隆SAG12基因5’側翼1522bp啟動子區(qū)域，與 GenBank上公布的SAG12基因（ATU37336）的上游序列有99%的核苷酸序列同源性。
　　3．通過一系列的酶切、電泳、目的片斷的回收過程，將ipt基因和PSAG12啟動子克隆到雙元表達