水生拉恩氏菌HX2菌株防治葡萄根癌病的初步研究.pdf

1、葡萄根癌病是由葡萄土壤桿菌(Agrobacterium vitis)引起的一種在生產上造成了較大經濟損失的世界性病害。HX2菌株是很有應用前景的生防菌株。本研究系統分析和研究了HX2菌株防治根癌病的相關性狀及其作用機理。
　　 HX2菌株對根癌土壤桿菌(Agrobacterium tumefaciens)、發(fā)根土壤桿菌(A.rhizogenes)、葡萄土壤桿菌(A.vitis)三個種的21個菌株；水稻白葉枯病菌(Xanthomo

2、nas oryzae pv.oryzae)、棉花細菌性角斑病菌(Xanthomonas campestris pv.malvacearum)、甘藍黑腐病菌(Xanthomonas campestripv.campestri)、黃瓜細菌性角斑病菌(Pseudomonas lachrymans)、番茄潰瘍病菌(Clavibactermichiganense subsp.michiganensis)和枯草芽孢桿菌(Bacillus subti

3、lis)等植物病原細菌的代表菌株；黃瓜枯萎病菌(Fusarium orysporum f.sp.cucumerinum)、西瓜枯萎病菌(Fusarium orysporum f.sp.niveum)、番茄灰霉病菌(Botrytis cinerea)和番茄早疫病菌(Alternaria solani)等植物病原真菌及金黃色葡萄球菌(Staphlococcus aureus)均具有平板抑制效果。表明HX2菌株具有較為廣泛的抑菌譜。在溫室中以

4、向日葵為指示植物，HX2菌株對由土壤桿菌屬三個種的21個菌株引起的根癌病均有不同程度的防治效果。在溫室葡徇活體植株上，HX2菌株菌體和上清液對由A.vitis K308引起的冠癭瘤的形成均有不同程度的抑制作用，但發(fā)酵液上清液的防效優(yōu)于菌體的防效。大田試驗中，HX2菌株對由A.vitis K308引起的葡萄根癌病有良好的防治效果，應用HX2菌株處理的葡萄植株根癌病的發(fā)病率及病情指數均有顯著性降低，防效達到80.2％。
　　 通過部

5、分生理生化特性和BIOLOG代謝指紋及16S rDNA序列測定和分析，鑒定HX2菌株為水生拉恩氏菌(Rahnella aquatilis)。應用質粒pSMC21轉化HX2菌株感受態(tài)細胞，獲得了綠色熒光蛋白基因gfp標記的HX2菌株。該標記菌株能穩(wěn)定表達綠色熒光，在生長速度、產生抗菌物質和生防效果等方面與野生型菌株均無顯著性差異。GFP標記示蹤表明HX2菌株在葡萄根表面和根際土壤中存活定殖時間均可以達到三個月；對土壤微生物群體數量無顯著影

6、響；在自然水體中存活能力差。
　　 HX2菌株產生抗菌物質的最適培養(yǎng)基篩選試驗表明，在碳源為葡萄糖、氮源為有機氮的培養(yǎng)基中能產生大量的抗菌物質。HX2菌株抗菌物質產生的適合培養(yǎng)條件為：28℃，初始pH為8.0，裝瓶量為30％，震蕩培養(yǎng)16 h。從HX2菌株發(fā)酵液中分離提取并部分純化了抗菌物質，物理和化學性質表明它可能是一種含有糖類基團的非蛋白和非酚類的極性小分子物質。該抗菌物質粗提物具有良好的熱穩(wěn)定性，對部分蛋白酶及RNase不