白細胞介素17(IL-17)在咬合創(chuàng)傷及牙周炎大鼠實驗?zāi)Ｐ脱乐芙M織中的表達變化及意義.pdf

1、目的:分析咬合創(chuàng)傷伴牙周炎實驗?zāi)Ｐ脱乐芙M織中白細胞介素17(IL-17)在不同時間的表達變化以及其他病理組織改變情況，進一步明確咬合創(chuàng)傷與牙周炎以及IL-17與牙周炎的關(guān)系，為臨床工作中疾病的治療提供更理性的方法和實驗依據(jù)。
　　方法:選用購于河北醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心的三個月大的Wistar雄性大鼠120只，體重250-280g。清潔，良好的口腔衛(wèi)生，沒有口腔疾病，良好的咬合關(guān)系。隨機將大鼠分為對照組(CG)，咬合創(chuàng)傷組(OG)，

2、牙周炎組(PG)，咬合創(chuàng)傷伴牙周炎組(OPG)四個組，30只大鼠為一組。再按照1d、3d、1w、2w、4w、6w將各組分成六小組，每組5只。
　　對大鼠進行麻醉和消毒。麻醉是用100g/L濃度水合氯醛(3ml/Kg)腹腔注射，消毒是用1％碘酊和75％酒精消毒口腔的兩側(cè)黏膜。咬合創(chuàng)傷組(OG)每只大鼠用復(fù)合樹脂光固化粘結(jié)長1-2mm，直徑0.6mm的正畸方絲于左側(cè)上頜第一磨牙牙合面中央。該組通過粘附一正畸方絲，使咬合面增高0.5-0

3、.8mm，來創(chuàng)建咬合創(chuàng)傷。牙周炎組(PG)每只大鼠用直徑0.2mm金屬結(jié)扎絲來結(jié)扎左側(cè)下頜第一磨牙，并盡量位于齦溝內(nèi)。咬合創(chuàng)傷伴牙周炎組(OPG)每只大鼠用復(fù)合樹脂光固化粘結(jié)長1-2mm，直徑0.6 mm的正畸方絲于左側(cè)上頜第一磨牙牙合面中央，在左側(cè)下頜第一磨牙齦溝內(nèi)位置結(jié)扎直徑0.2mm金屬絲。對照組(CG)大鼠不做處理。所有的大鼠裝在無病原體的籠子里，25攝氏度，濕度60％-70％，飼喂商業(yè)飼料。分別在第1d、3d、1w、2w、4w

4、、6w將每組大鼠腹部注射10％水合氯醛進行麻醉，進行4％多聚甲醛的反心臟方向灌注，立即解剖左側(cè)上頜下頜磨牙區(qū)的牙周組織。去除實驗牙上結(jié)扎絲及影響材料。將組織用4％多聚甲醛溶液在4℃環(huán)境中固定48h，然后用10％ EDTA溶液脫鈣4W，然后進行包埋，取正中矢狀面切片，厚度5μm。
　　進行HE染色和IL-17免疫組織化學(xué)染色，觀察牙周組織病理變化和IL-17陽性細胞數(shù)目及染色情況。對IL-17免疫組織化學(xué)染色的結(jié)果用Image Pr

5、o-Plus6.0圖像分析軟件進行分析。用SPSS13.0統(tǒng)計學(xué)軟件對數(shù)據(jù)進行分析。
　　結(jié)果:
　　1 HE染色結(jié)果
　　1.1對照組
　　對照組各小組間染色結(jié)果無明顯差異。牙周膜纖維分布位置井然有序，可見排列整齊的成纖維細胞，其排列相平于纖維束長軸方向。牙周韌帶的頂端與牙槽骨緊密相連。牙骨質(zhì)平面光整，有扁平的成牙骨質(zhì)細胞在牙骨質(zhì)表面的牙周膜中。牙槽骨與牙周膜臨界處表面平整，可見成骨細胞。在牙周膜和牙槽骨中可見

6、血管，幾乎沒有血細胞在血管中。
　　1.2實驗組
　　咬合創(chuàng)傷組(OG):1d組與對照組表現(xiàn)相似，牙周組織無明顯改變。3d組實驗?zāi)パ腊Y狀較輕，牙周膜纖維組織排列紊亂，牙周膜毛細血管擴張，偶見多核巨細胞，可能是破骨細胞。1w組牙周膜纖維組織排列紊亂明顯，破骨細胞位于牙槽骨表面。2w組牙周纖維更加紊亂，破骨細胞數(shù)目增加，骨吸收活動加強。4w組破骨細胞數(shù)目最多最活躍，出現(xiàn)明顯骨吸收，結(jié)締組織纖維變性溶解，病損程度達高峰。6w組與4

7、W組比較，癥狀有所減輕。但仍可見破骨細胞。整個過程牙齦無較大變化。牙周炎組(PG):1d組實驗?zāi)パ腊Y狀較輕，可見牙周膜纖維組織排列紊亂。3d組實驗?zāi)パ姥乐芙M織出現(xiàn)毛細血管擴張充血。結(jié)締組織內(nèi)可見少量炎細胞，上皮釘突增多變長，出現(xiàn)破骨細胞。1w組纖維結(jié)締組織排列明顯紊亂，有破骨細胞和骨吸收。2w組，實驗牙牙槽骨骨吸收更加明顯，骨吸收陷窩增大，破骨細胞數(shù)目增加，大量炎細胞浸潤牙周組織，結(jié)締組織纖維變性溶解，病損程度達高峰。4w組6w組病損程

8、度逐漸減輕，破骨細胞數(shù)目減少，可見成骨細胞。咬合創(chuàng)傷伴牙周炎組(OPG):1d組實驗?zāi)パ姥乐芙M織毛細血管擴張充血，纖維排列紊亂，結(jié)締組織內(nèi)可見少量炎細胞。3d組實驗?zāi)パ姥啦酃潜砻娉霈F(xiàn)破骨細胞，纖維排列更加紊亂。1w組破骨細胞數(shù)目增多，血管擴張充血更加嚴重，炎細胞增多。2w組實驗牙牙周結(jié)締組織的基質(zhì)及膠原纖維變性，溶解。破骨細胞明顯增多，牙槽骨吸收破壞明顯，病損程度達高峰。4w組6w組病損程度逐漸減輕，仍有毛細血管擴張充血和炎細胞浸潤結(jié)締

9、組織，牙槽骨破壞不再活躍，有的部位可有成骨細胞。
　　2白細胞介素17（IL-17）免疫組化表達
　　2.1對照組
　　對照組各小組間染色結(jié)果無明顯差異。大鼠的牙齦結(jié)締組織固有層及牙周膜的成纖維細胞中有弱陽性表達。
　　2.2實驗組
　　1d組中IL-17呈弱陽性表達，3d、1w組牙周組織中IL-17的陽性表達逐漸增強。牙周炎組和咬合創(chuàng)傷伴牙周炎組2W達到高峰，咬合創(chuàng)傷組4w組達到高峰，高峰期后，的實驗組中

10、IL-17表達強度降低，但依然有較高表達。在每個實驗組中，隨著實驗時間的延長，IL-17的表達強度都呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢。將咬合創(chuàng)傷組(OG)，牙周炎組(PG)，咬合創(chuàng)傷伴牙周炎組(OPG)三個實驗組中相同時間所對應(yīng)的IL-17的陽性表達強度進行比較，咬合創(chuàng)傷伴牙周炎組(OPG)高于其他兩組。
　　3數(shù)據(jù)分析結(jié)果
　　將OG組、PG組、OPG組染色結(jié)果分別與對照組用Kruskal-Wallis H檢驗進行比較，均得出P＜0

11、.05，即有統(tǒng)計學(xué)意義，進行Wilcoxon秩和檢驗，結(jié)果是OG組與對照組在1d、3d組P＞0.05，無統(tǒng)計意義，在其他時間組均有統(tǒng)計學(xué)意義，PG組與對照組在1d組P＞0.05，無統(tǒng)計意義，在其他時間組均有統(tǒng)計學(xué)意義。OPG組與對照組比較，結(jié)果均為P＜0.05，均有統(tǒng)計學(xué)意義;將OG組、PG組、OPG組組內(nèi)的各小組染色結(jié)果分別用Kruskal-WallisH檢驗進行比較，均得出P＜0.05，即OG組各小組間、PG組各小組間、OPG組各小

12、組間有統(tǒng)計學(xué)意義;用Kruskal-Wallis H檢驗分別比較OG組與OPG組、PG組與OPG組，均得出P＜0.05，即OG組與OPG組、PG組與OPG組比較，均有統(tǒng)計學(xué)意義。進行Wilcoxon秩和檢驗，結(jié)果是OG組與OPG組在3d、1w、2w組P＜0.05，有統(tǒng)計意義。PG組與OPG組在3d、1w、2w、4w組P＜0.05，有統(tǒng)計意義。
　　結(jié)論:
　　1 IL-17在牙周組織中的表達強度與牙周組織破壞程度成正相關(guān)，I