塞來(lái)昔布對(duì)胃癌細(xì)胞耐藥性的影響及其機(jī)制研究.pdf

1、背景和目的：腫瘤細(xì)胞耐藥的出現(xiàn)是導(dǎo)致化療失敗的主要原因，在眾多耐藥機(jī)制中，腫瘤細(xì)胞對(duì)凋亡抵抗是其重要因素之一?；熆梢鸷艘蜃覭B(NF-kB)的轉(zhuǎn)錄活性增加，活化的NF-kB可調(diào)節(jié)凋亡抑制蛋白(IAPs)家族成員表達(dá)上調(diào)。這一傳導(dǎo)通路的改變可能是誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生凋亡抵抗繼發(fā)耐藥的途徑之一.IAvin、Survivin是近年發(fā)現(xiàn)的IAPs家族新成員，具有較強(qiáng)的抗凋亡作用，參與腫瘤的發(fā)生和發(fā)展。在腫瘤產(chǎn)生繼發(fā)耐藥的過(guò)程中，是否有NF-kB

2、活化及Livin、Survivin的共同參與，目前尚不清楚。胃癌是我國(guó)高發(fā)的惡性腫瘤，化療是其重要的治療手段，然而胃癌化療往往因耐藥而導(dǎo)致最終治療失敗，耐藥問(wèn)題是臨床亟待解決的難題之一。特異性環(huán)氧化酶-2(COX-2)抑制劑塞來(lái)昔布是臨床常用的NSAIDs類解熱鎮(zhèn)痛抗炎藥，對(duì)結(jié)直腸癌、胃癌等多種惡性腫瘤細(xì)胞具有抑制作用，能抑制肺癌細(xì)胞中NF-kB的核轉(zhuǎn)位而抑制其轉(zhuǎn)錄活性。對(duì)于塞來(lái)昔布能否通過(guò)抑制化療后NF-kB的活性，阻斷Livin、S

3、urvivin的凋亡抑制，增加胃癌細(xì)胞對(duì)化療藥物的敏感性，目前尚未見(jiàn)相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道。 本研究以胃腺癌細(xì)胞株SGC7901及其耐藥株SGC7901/VCR為研究對(duì)象，檢測(cè)NF-kB、Livin、Survivin在兩株細(xì)胞中的表達(dá)；并檢測(cè)分析應(yīng)用塞來(lái)昔布干預(yù)后，兩株細(xì)胞增殖和凋亡的變化以及NF-kB、Livin和Survivin的表達(dá)情況.探討NF-kB、Livin、Survivin在胃癌細(xì)胞耐藥形成過(guò)程中的可能作用，以及塞來(lái)昔布可否

4、增敏化療、逆轉(zhuǎn)耐藥的作用及其可能的作用機(jī)制。 方法：1.體外培養(yǎng)胃腺癌細(xì)胞SGC7901及其耐藥細(xì)胞SGC7901/VCR.2.MTT法檢測(cè)藥物(VCR、塞來(lái)昔布)干預(yù)后上述兩株胃癌細(xì)胞的增殖情況。3.應(yīng)用ELISA法測(cè)定上述兩株細(xì)胞中NF-kB核轉(zhuǎn)錄活性。4.Western blot方法檢測(cè)Livin、Survivin在SGC7901，SGC7901/VCR細(xì)胞中的表達(dá)，以及塞來(lái)昔布和塞來(lái)昔布聯(lián)合VCR對(duì)上述兩株細(xì)胞Livin

5、、Survivin及NF-kB表達(dá)的影響。5.流式細(xì)胞術(shù)分析兩株細(xì)胞經(jīng)VCR或/和塞來(lái)昔布干預(yù)后的凋亡率的變化。 結(jié)果：1.SGC7901細(xì)胞與SGC7901NCR細(xì)胞對(duì)VCR的藥物敏感性不同，VCR對(duì)后者的增殖抑制作用明顯減弱，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡減少。2.SGC7901/VCR細(xì)胞核內(nèi)NF-kB p65蛋白表達(dá)(0.404±0.025)較SGC7901細(xì)胞(0.301±0.016)顯著增多(P<0.01)，表明NF-kB活性增強(qiáng)；L

6、ivin、Survivin的表達(dá)在SGC7901/VCR細(xì)胞中均發(fā)生上調(diào)(P<0.05)。3.塞來(lái)昔布對(duì)上述兩株細(xì)胞具有增殖抑制作用，塞來(lái)昔布作用SGC7901/VCR細(xì)胞后Livin、Survivin的表達(dá)呈劑量、時(shí)間依賴性下調(diào)趨勢(shì)。4.塞來(lái)昔布聯(lián)合VCR對(duì)Livin、Survivin具有協(xié)同抑制作用，并對(duì)SGC7901/VCR細(xì)胞的增殖抑制作用增強(qiáng)，誘導(dǎo)細(xì)胞凋t增加. 結(jié)論：1.NF-kB活化及Livin、Survivin表