大鼠腦挫傷后腦組織β-APP、MAP-2的時序性表達.pdf

1、目的：應(yīng)用免疫組化SABC法、Western blot免疫印跡法及實時熒光定量RT-PCR技術(shù)檢測實驗性大鼠腦挫傷后腦組織中β-APP和MAP-2的表達變化規(guī)律，以期為法醫(yī)學(xué)實踐中大致推斷顱腦損傷時間提供科學(xué)的參考依據(jù)。
　　 方法：采用Feeney's法建立大鼠腦挫傷模型。選取64只健康成年SD大鼠，雌雄不限，體重250±10g(由山西醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心提供)，隨機分為實驗組(n=56)及對照組(n=8)，實驗組依據(jù)損傷時間

2、不同再分為7個亞組。均實施麻醉后，實驗組大鼠采用自由落體打擊法于顱骨中線旁3mm處造成腦挫傷模型，通過常規(guī)HE染色認定損傷部位及損傷程度，對大鼠腦挫傷后14d內(nèi)繼發(fā)性腦損傷的病理學(xué)改變、β-APP和MAP-2的分布特征進行光鏡觀察，同時分別于損傷后1h、4h、12h、48h、72h、7d、14d七個時間點(每個時間點8只)取挫傷處腦組織各100mg，置于液氮中保存?zhèn)溆?；對照組大鼠未打擊造傷，其余處理與實驗組相同。應(yīng)用免疫組化SABC法、

3、免疫印跡Western blot法從蛋白水平觀察腦挫傷后β-APP、MAP-2的時序性變化，結(jié)合圖像分析技術(shù)及統(tǒng)計學(xué)分析進行結(jié)果分析；應(yīng)用實時熒光定量RT-PCR技術(shù)并結(jié)合圖像分析技術(shù)從核酸水平定量半檢測實驗組及對照組動物的各腦組織β-APP、MAP-2mRNA的時序性變化，觀察上述指標與損傷時間的關(guān)系。
　　 結(jié)果：三種方法統(tǒng)計結(jié)果顯示：(1)大鼠腦挫傷后β-APP在腦組織中的表達于傷后12h達到峰值，隨后陽性反應(yīng)細胞逐漸減少

4、，7d后仍有少量表達但仍高于對照組，14d后表達基本恢復(fù)至接近對照組水平；(2)MAP-2于腦挫傷后1h表達明顯丟失，4h后蛋白丟失達到高峰，12h蛋白開始部分恢復(fù)表達，48h蛋白量逐漸增多，14d蛋白表達達到高峰。
　　 結(jié)論：大鼠腦挫傷后腦組織中β-APP和MAP-2表達隨著損傷時間呈規(guī)律性變化，有望用于法醫(yī)學(xué)鑒定及早期法醫(yī)學(xué)損傷時間推斷。免疫組化技術(shù)操作簡單且易行，實時熒光定量RT-PCR技術(shù)檢測分子水平的變化敏感而且精確