Let-7b在皮膚創(chuàng)傷愈合中的功能研究.pdf

1、皮膚是能夠直接與外界環(huán)境接觸的器官，對人體有著非常重要的作用，并且皮膚表皮及其它的附屬物可作為一個保護屏障，阻擋病原物及其異物的侵入，并且能夠防止身體內(nèi)部體液的流失，然而皮膚創(chuàng)傷愈合是一個復雜的，多因素參與的過程，由于疾病或者受傷導致皮膚屏障的破壞，有可能引起感染、潰瘍、疤痕形成、甚至發(fā)展為慢性傷口等并發(fā)癥，嚴重影響著人們的正常生活，了解創(chuàng)傷愈合過程中發(fā)揮作用的各個因素，對于指導臨床促進創(chuàng)傷愈合，以及創(chuàng)傷的治療有重要的意義。
　　

2、miRNAs是一類長度為19-24個核苷酸的非編碼單鏈小分子RNA，在進化上具有高度保守性，通常以單拷貝、多拷貝或基因簇等形式存在于基因組中。成熟的miRNA能夠與靶標mRNA分子的3'末端非翻譯區(qū)特異性結合，形成RNA沉默復合體(RISC)，RISC對靶標基因mRNA產(chǎn)生抑制性信號，使蛋白表達受到抑制，或直接導致mRNA的降解，參與轉錄后基因表達調(diào)控，近年來已發(fā)現(xiàn)在創(chuàng)傷愈合的不同階段都有特定的miRNA發(fā)揮重要的作用。
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3、t-7是最先在線蟲中被發(fā)現(xiàn)的一類miRNA，其生物學功能十分廣泛，在細胞的遷移與增殖、腫瘤發(fā)生的過程中都發(fā)揮了非常重要的功能。目前l(fā)et-7b只在體外進行了一些功能研究，它能夠抑制黑色素瘤細胞增殖，但是關于皮膚創(chuàng)傷愈合中發(fā)揮的具體功能尚未見報道。為了研究let-7b在皮膚創(chuàng)傷愈合中的功能，我們首先在HaCaT細胞中過表達了let-7b，發(fā)現(xiàn)過表達let-7b能抑制HaCaT細胞遷移，但不影響細胞增殖和凋亡過程。為了確定let-7b在體內(nèi)

4、的功能，利用受精卵顯微注射的方法構建了在皮膚角質(zhì)細胞中特異過表達let-7b的轉基因小鼠。通過對轉基因小鼠皮膚創(chuàng)傷愈合過程的觀察和分析，發(fā)現(xiàn)let-7b導致了小鼠皮膚創(chuàng)傷愈合的重上皮化速度減慢。進一步研究證實，let-7b不影響細胞增殖而是抑制角質(zhì)細胞的遷移來影響整個創(chuàng)傷愈合過程。通過生物信息學的方法預測了let-7b的靶分子，挑選與遷移相關分子進行熒光素酶報告基因活性分析實驗，發(fā)現(xiàn)Igf2bp2，Limid，Vangl2是let-7b

5、的靶分子。進一步研究發(fā)現(xiàn)IGF2BP2在小鼠創(chuàng)傷后表達量上升，尤其在創(chuàng)傷的前緣，提示IGF2BP2在創(chuàng)傷愈合過程中發(fā)揮重要的作用。IGF2BP2能促進HaCaT細胞的遷移，并能激活ERK信號通路;HaCaT細胞過表達let-7b后，IGF2BP2表達下降，ERK信號通路明顯受到阻滯。這一結論也在let-7b轉基因小鼠得到了證實。
　　本研究首次利用體內(nèi)和體外模型系統(tǒng)研究了let-7b在皮膚創(chuàng)傷愈合過程中作用，闡明了let-7b在創(chuàng)