抗癲癇藥對大鼠認知及海馬GluR2和Syn表達的影響.pdf

1、實驗目的：
　　 癲癇是大腦神經(jīng)元過度同步異常放電導致的神經(jīng)系統(tǒng)功能異常綜合征，是腦的原發(fā)病中最常見的一種，也是兒童時期常見的慢性中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾患之一。我國癲癇的患病率為0.70％，兒童癲癇大多起病于學齡前期，7歲以內占小兒癲癇的82.2％，以1歲以內最高。
　　 目前抗癲癇治療主要依靠長期口服抗癲癇藥(antiepilepticdrugs,AEDs)控制發(fā)作為主，通常需要3～5年以上的時間，有的甚至需要終身服藥?？拱d癇

2、治療主張合理用藥，提倡單藥治療。主要治療目標是完全控制發(fā)作，同時避免或減少不良反應的發(fā)生，以提高患者生活質量。臨床研究證明約70％～80％的患兒通過合理正規(guī)服用抗癲癇藥物，發(fā)作可以得到完全控制。但長期應用AEDs可引起一系列的毒副作用，尤其是對認知的損害，日益受到人們的關注。認知是大腦的高級神經(jīng)活動，包括理解、記憶、學習能力、注意力、警覺性和知覺等。AEDs因對病變部位神經(jīng)元的興奮性和維持正常認知功能神經(jīng)元的興奮性有同樣的降低作用，故可

3、導致一定程度上的認知損害。兒童處于生長發(fā)育階段，器官發(fā)育尚不完善，各個系統(tǒng)的功能尚不健全，較成人更易受藥物影響。托吡酯對詞語流暢、注意力、信息加工速度和語言技巧，感知覺、操作記憶等均有影響，已被大家所公認，亦有報道丙戊酸鈉可影響認知。奧卡西平是一種無活性前體物，在肝臟快速被胞質酶還原成有藥理活性的單羥基衍生物（MHD）進而阻斷電壓依賴性鈉通道發(fā)揮作用。目前研究表明，奧卡西平無論是單藥治療還是作為添加治療，對認知功能無明顯影響。左乙拉西坦

4、屬吡咯烷酮衍生物，為吡拉西坦類似物，是一種新型抗癲癇藥物，具有廣譜、起效迅速的抗癲癇活性，其作用機制尚未完全明了，新近研究發(fā)現(xiàn)腦內突觸囊泡蛋白SV2A是其發(fā)揮抗癲癇作用的獨特位點。目前國內外研究認為左乙拉西坦對認知功能無不良影響。
　　 目前AEDs對認知功能影響的研究，無論是動物實驗，還是成人和兒童患者門診隨診觀察，主要是通過行為學測試和一些智力行為量表檢查，尚未有通過觀察腦組織病理結構的改變來研究AEDs對認知功能影響的報道

5、。并且目前研究主要針對單藥治療，聯(lián)合用藥鮮有報道。
　　 突觸是神經(jīng)元間信息傳遞的媒介，突觸可塑性被認為是學習和記憶的電生理指標，突觸丟失及功能損傷與認知功能下降最具有直接關系。谷氨酸受體2（glutamatereceptor2,GluR2）是AMPA受體的一種亞基，是突觸后膜的重要組成部分；突觸體素(synaptophysin,Syn)又稱突觸小泡蛋白，是突觸囊泡特異性膜蛋白，是突觸前膜的標志物。本實驗將丙戊酸鈉、奧卡西平、左

6、乙拉西坦單藥治療，以及左乙拉西坦與前兩者分別聯(lián)合應用于幼年直至成年期的Wistar大鼠，意在觀察AEDs單獨應用以及聯(lián)合應用對大鼠認知功能的影響。通過行Moriss水迷宮和穿梭箱實驗測試比較各組大鼠的空間性和條件性學習記憶能力，應用免疫組化技術檢測海馬GluR2和Syn的表達，將行為學測試和腦組織病理檢查相結合，來研究AEDs對大鼠認知功能的影響，為AEDs臨床應用奠定基礎，為預防和減少AEDs引起的副作用提供科學依據(jù)，提高服藥的依從性

7、，改善癲癇患者的生活質量。
　　 實驗方法：
　　 (1)建立長期應用AEDs的Wistar大鼠模型，健康Wistar大鼠60只（山東大學實驗動物中心提供），雌雄不拘，鼠齡21～22d，體重48～58g，隨機分為6組，每組10只，即對照組(CON組)、丙戊酸鈉組(VPA組)、左乙拉西坦組(LEV組)、奧卡西平組(OXC組)、左乙拉西坦+丙戊酸鈉組（L+V組）、左乙拉西坦+奧卡西平組（L+0組）。按照分組給藥，劑量分別為：

8、對照組生理鹽水lOml/(kg,d)，VPA組VPA200mg/(kg.d),LEV組LEVI00mg/(kg.d),OXC組OXClOOmg/(kg.d),L+V組LEVlOOmg/(kg.d)+VPA200mg/(kg.d),L+O組LEVlOOmg/(kg.d)+OXClOOmg/(kg.d)。灌胃給藥，2次/d，連續(xù)90d。給藥期間，每周稱重1次，根據(jù)體重調整劑量。
　　 (2)Moriss水迷宮測試逃避潛伏期、正確率、

9、運行時間和穿梭箱實驗測試主動回避次數(shù)、主動回避潛伏期、被動回避潛伏期，比較各組大鼠的空間和條件性學習記憶能力。
　　 (3)行為學測試結束后，苯巴比妥鈉腹腔麻醉，斷頭取腦，留取海馬，多聚甲醛固定，石蠟包埋，連續(xù)冠狀切片，片厚5μm，免疫組化技術檢測海馬GluR2和Syn的表達。
　　 結果：
　　 (1)長期應用AEDs的大鼠模型：實驗動物一般情況良好，活動、攝食等情況良好，無死亡現(xiàn)象。
　　 (2)與對

10、照組比較，VPA組水迷宮測試逃避潛伏期、正確率、運行時間差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，穿梭箱主動回避次數(shù)、主動回避潛伏期、被動回避潛伏期差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，其余各組各項指標差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。
　　 (3)與對照組比較，免疫組化檢測顯示LEV組、OXC組、L+O組GluR2和Syn的表達差異均無統(tǒng)計學意義(P>O.05)；VPA組GIuR2和Syn的表達均顯著下降(P<0.05)；L+V組的Glu

11、R2表達顯著下降(P0.05）。
　　 結論：
　　 LEV、OXC、L+O、L+V不影響認知功能，VPA影響認知功能可能與其使GluR2和Syn的表達下降有關。
　　 創(chuàng)新性和意義：
　　 (1)本研究的創(chuàng)新點是首先在國內把腦組織病理結構與行為學測試相結合的方法來研究AEDs對Wistar大鼠認知功能影響，這為研究臨床應用AEDs的副作用提供了理論依據(jù)。<