犬急性心肌梗死后自體骨髓間充質(zhì)干細胞移植對血管密度和心肌凋亡影響的實驗研究.pdf

1、目的：將體外分離培養(yǎng)的犬自體骨髓間充質(zhì)干細胞，誘導標記后移植至急性心肌梗死區(qū)，觀察其對血管密度和心肌細胞凋亡的影響。 方法：①動物：健康雜種犬36只，隨機分成細胞移植組、對照組，18只/組，實驗過程中對動物的處置符合動物倫理學標準。②干細胞培養(yǎng)、誘導、標記：無菌抽取實驗犬骨髓液10 mL，經(jīng)Percoll液密度梯度離心后貼壁法體外培養(yǎng)骨髓間充質(zhì)干細胞，流式細胞儀檢測細胞表面抗原的表達：傳代后行5-氮胞苷誘導(5-Aza)，5-溴

2、脫氧尿嘧啶核苷(BrdU)標記備用。③干細胞移植：兩組犬均建立急性心肌梗死模型，移植組在梗死區(qū)邊緣4個不同部位分別局部注射植入誘導標記后的骨髓間充質(zhì)干細胞懸液2mL，對照組在相應部位注射等量的DMEM培養(yǎng)基。④指標檢測：分別于細胞移植后1，2，4周取心臟標本，采用原位末端標記法檢測心肌細胞凋亡情況和免疫組織化學染色法檢測血管密度。 結果：①原代和傳代細胞體外培養(yǎng)：細胞體外培養(yǎng)24小時后貼壁明顯，細胞呈圓形梭形和不規(guī)則形等多種形態(tài)

3、；換液傳代后，細胞形態(tài)趨于一致，呈梭形。骨髓間充質(zhì)干細胞體外培養(yǎng)分裂增殖能力強，細胞呈集落式生長，集落外觀呈‘漩渦'狀，細胞生長曲線為“S”形②細胞表面標志鑒定：傳代后的骨髓間充質(zhì)干細胞CD34和CD31陽性率小于5％，而CD44和CD105陽性率高達90％以上。③心肌細胞凋亡指數(shù)測定：移植部位的標本切片經(jīng)抗BrdlJ免疫熒光染色后呈陽性，說明移植的骨髓間充質(zhì)干細胞已在心肌梗死部位定植。經(jīng)TUNEL染色后凋亡細胞核呈棕黃色，與對照組相比

4、，移植組細胞凋亡指數(shù)顯著降低(P<0.01)。④心肌梗死區(qū)血管密度情況：干細胞移植后2周，移植組梗死區(qū)血管密度明顯高于對照組(P<0.05)；隨移植后時間延長，兩組間血管密度差異顯著性增加(4周時，P<0.01)，同時，移植組梗死區(qū)血管密度也隨移植時間延長逐漸增加(經(jīng)重復測量方差分析F=439.588，P<0.01)。 結論：①骨髓間充質(zhì)干細胞體外分離培養(yǎng)簡單、增殖能力強、生長快，是細胞移植和心臟組織工程的理想種子細胞②犬自體骨