缺氧誘導因子-1α（HIF-1α）反義寡核苷酸對宮頸癌細胞增殖的影響.pdf

1、背景：近年來，隨著在惡性腫瘤方面的研究不斷深入，有學者發(fā)現(xiàn)低氧誘導因子-1α(HIF-1α)是介導腫瘤細胞缺氧適應的關(guān)鍵性轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子，并可在基因水平上直接調(diào)控血管內(nèi)皮生長因子(VGEF)的表達，進而促進腫瘤生長。通常，生長較快的腫瘤，其間質(zhì)血管多較豐富而纖維結(jié)締組織較少，生長緩慢的腫瘤其間質(zhì)血管則較少。如果沒有新生血管供應營養(yǎng)，腫瘤達到1～2nm的直徑或厚度即10<'7>個細胞左右將不再增大，因此誘導新生血管生成就成為惡性腫瘤生長、侵

2、襲、轉(zhuǎn)移的前提條件之一。腫瘤細胞的過度增生，而血管生長相對不足引起新生瘤細胞局部相對缺氧，缺氧又反饋性的刺激VEGF表達，促使血管增生為腫瘤進一步發(fā)展創(chuàng)造條件。 目的：研究缺氧誘導因子-1α(HIF-1α)反義寡核苷酸對人宮頸癌Hela體內(nèi)生長的影響，觀察其對缺氧誘導因子-1α(HIF-1α)及血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)表達的影響，為宮頸癌的發(fā)病機理研究提供新的思路與方法，為進一步探討是否可通過反義寡核苷酸阻斷HIF-1α的表

3、達，抑制VEGF蛋白的表達，從而達到為治療宮頸癌提供重要理論依據(jù)的目的。 方法：采用裸鼠移植瘤模型，將宮頸癌細胞株Hela制備成濃度為1×10<'8>的細胞懸液，種植于18只4～6周齡裸鼠肩部皮下，待腫瘤長至直徑達1.0 cm(約20天左右)時，18只裸鼠隨機分為3組(每組6只)：對照組(A組)、正義治療組(B組)、反義治療組(C組)，分別注射生理鹽水，HIF-1α正義寡核苷酸和HIF-1α反義寡核苷酸。注射劑量：100μg/次

4、。用100μl生理鹽水稀釋后，在瘤體內(nèi)多點注射，每3天重復注射一次，共8次。注射藥物后，每天觀察腫瘤生存狀態(tài)，每3天用游標卡尺測量腫瘤的最長徑(a)和最短徑(b)，計算腫瘤的體積(V，V=1/67πab<'2>)，繪制皮下腫瘤生長曲線。治療4周后處死裸鼠，測定腫瘤的重量和體積并計算腫瘤抑制率，應用免疫組化技術(shù)檢測種植瘤內(nèi)VEGF和HIF-1α的變化。所得數(shù)據(jù)應用SPSS11.0系統(tǒng)統(tǒng)計分析軟件包進行處理。結(jié)果： 1、裸鼠體內(nèi)抑瘤

5、實驗顯示，缺氧誘導因子-1 α(HIF-1α)反義寡核苷酸(asHIF-1α)有明顯的抑瘤作用，腫瘤生長曲線減緩，體積抑制率為33﹪、瘤重抑制率為54﹪(P<0.05)： 2、免疫組化檢測顯示，反義治療組種植瘤內(nèi)HIF-1α蛋白含量顯著降低(P<0.05)； 3、免疫組化檢測顯示，反義治療組種植瘤內(nèi)VEGF蛋白含量顯著降低(P<0.05)。 結(jié)論： 1、缺氧誘導因子-1α反義寡核苷酸對實驗動物荷瘤生長(體