TNF-a聯(lián)合氧化苦參堿對成纖維細胞增殖的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機制研究.pdf

1、本文研究目的：探討腫瘤壞死因子-alpha(TNF-α)聯(lián)合氧化苦參堿(OM)對肺成纖維細胞增殖的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機制的研究，從細胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的角度探討塵肺發(fā)病機制，為治療塵肺提供科學(xué)依據(jù)。 研究方法：對SD大鼠乳鼠肺成纖維細胞進行原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)，傳至4-5代后，用不同濃度的TNF-α聯(lián)合不同濃度OM刺激成纖維細胞，培養(yǎng)一定的時間，用MTT比色法檢測TNF-α對成纖維細胞增殖的影響；用Western blot技術(shù)檢測成纖維細胞膜G<,

2、s>蛋白的表達；用免疫細胞化學(xué)技術(shù)測定成纖維細胞內(nèi)蛋白激酶C(PKC)和核轉(zhuǎn)錄因子-кB(NF-кB)的表達。 研究結(jié)果： 1.細胞增殖實驗結(jié)果顯示：當不同濃度的TNF-α作用于成纖維細胞時，在不同時間點，各實驗組光密度(OD)值均較對照組顯著增高(P<0.05)。在4h時間點，10ng/mlTNF-α組OD值較5ng/ml和20ng/mlTNF-α組高，20ng/mlTNF-α組OD值較5ng/mlTNF-α組高，差異

3、均有顯著性(P<0.05)。在24h時間點，隨著TNF-α劑量的增加，各實驗組OD值也明顯升高，且各組間差異均有顯著性(P<0.05)。其中10ng/ml和20ng/mlTNF-α組0D值隨著作用時間的延長而明顯增高。 2.Western blot結(jié)果顯示：當不同濃度的TNF-α作用于成纖維細胞時，在不同時間點，各實驗組間G<,s>蛋白的表達均無明顯的統(tǒng)計學(xué)差異。 3.PKC結(jié)果顯示：當單獨TNF-α作用成纖維細胞時，在

4、不同時間點，各實驗組PKC表達陽性單位數(shù)均較對照組高，其中10ng/mlTNF-α組PKC表達陽性單位數(shù)較5ng/ml和20ng/mlFNF-α組高，其差異均具有顯著性(P<0.05)。在24h時間點，20ng/mlTNF-α組PKC表達陽性單位數(shù)高于5ng/mlTNF-α組，較4h時間點相同劑量組顯著增高(P<0.05)。當TNF-α聯(lián)合0M作用于成纖維細胞時，各實驗組PKC表達陽性單位數(shù)值均明顯高于對照組。隨著OM劑量的增加，成纖維

5、細胞PKC表達陽性單位數(shù)呈現(xiàn)逐漸降低趨勢。10ng/ml TNF-α聯(lián)合400μg/ml和800μg/mlOM組成纖維細胞PKC表達陽性單位數(shù)明顯低于10ng/mlTNF-α組，其中10ng/mlTNF-α聯(lián)合800μg/m10M組成纖維細胞PKC表達陽性單位數(shù)較10ng/mlTNF-α聯(lián)合200μg/m10M組明顯降低(P<0.05)。 4.NF-кB結(jié)果顯示：當TNF-α單獨作用于成纖維細胞時，在不同時間點，各實驗組成纖維細

6、胞NF-кB表達陽性單位數(shù)均較對照組明顯增高，隨著TNF-α劑量的增加，NF-кB表達陽性單位數(shù)均呈現(xiàn)增高趨勢。在4h時間點，20ng/mlTNF-α組NF-кB表達陽性單位數(shù)明顯高于5ng/ml和10ng/mlTNF-α組；在24h時間點，10ng/ml和20ng/mlTNF-α組NF-кB表達陽性單位數(shù)均較5ng/mlTNF-α組顯著增高，各實驗組成纖維細胞NF-кB表達陽性單位數(shù)均較4h時間點相同劑量組低，其差異均有顯著性(P<0

7、.05)。當TNF-α聯(lián)合OM作用于成纖維細胞時，各實驗組NF-кB表達陽性單位數(shù)明顯高于空白對照組。10ng/mlTNF-α聯(lián)合400μg/m10M組NF-кB表達陽性單位數(shù)顯著低于10ng/mlTNF-α組，10ng/mlTNF-α聯(lián)合200μg/ml和800μg/m10M組(P<0.05)。10ng/mlTNF-α聯(lián)合800μg/m10M組NF-кB表達陽性單位數(shù)明顯高于其余各實驗組(P<0.05)。 研究結(jié)論：