重組腺病毒介導的sip38抑制鈦顆粒誘導的破骨細胞形成和骨溶解.pdf

1、實驗目的：
　　探討 MAPKs(絲裂原活化蛋白激酶)在鈦顆粒誘導的破骨細胞形成中的作用，并通過腺病毒介導的siRNA干擾p38的表達,觀察sip38對鈦顆粒誘導的破骨細胞形成和骨溶解的影響及可能機制。
　　實驗方法：
　　1.體外實驗中，采用鈦顆粒懸液(0.1mg/ml)刺激原代破骨細胞前體細胞，通過TRAP(抗酒石酸酸性磷酸酶)染色、Western Blot觀察鈦顆粒對破骨細胞成熟分化及相關蛋白TRAP的影響，并通

2、過Western Blot檢測MAPKs(p38 MAPK,ERK,JNK)信號通路的激活情況。
　　2.通過Western Blot、免疫熒光等檢測經腺病毒介導的sip38干擾后各組破骨細胞相關蛋白 TRAP的表達，以及抗酒石酸酸性磷酸酶染色鑒定成熟破骨細胞，并通過PCR檢測干擾p38后相關基因NFATc1、c-fos的變化.
　　3.體內實驗中，構建小鼠顱骨顆粒誘導骨溶解模型，通過H&E染色、抗酒石酸酸性磷酸酶染色及免疫

3、組化等，觀察不同處理組顱骨骨溶解及破骨細胞數目變化情況。
　　實驗結果：
　　1.鈦顆粒可通過激活p38 MAPK、JNK信號通路促進破骨細胞的分化成熟，并且p38 MAPK的激活更加明顯。
　　2.通過體外誘導培養(yǎng)破骨細胞并干擾p38的表達及磷酸化，觀察到sip38可通過降低c-fos、NFATc1基因的表達，從而抑制鈦顆粒誘導的破骨細胞分化成熟和特異性TRAP蛋白的表達。
　　3.成功建立鈦顆粒誘導的小鼠顱骨

4、骨溶解模型，通過 siRNA干擾p38的表達及激活后，破骨細胞數目及顆粒誘導的顱骨骨溶解明顯減少。
　　實驗結論：
　　本課題證明鈦顆?？赏ㄟ^p38 MAPK信號通路促進破骨細胞的分化成熟，通過腺病毒介導的小干擾RNA沉默p38可抑制p38 MAPK信號通路的激活，從而降低調控破骨細胞分化成熟的相關基因 NFATc1及 c-fos的表達，抑制磨損顆粒誘導的破骨細胞前體細胞的成熟分化。局部注射sip38可有效減少鈦顆粒誘導的小