EB病毒相關胃癌組織及胃癌細胞系中LOXL1基因甲基化狀態(tài)與表達的研究.pdf

1、EB病毒相關胃癌組織及胃癌細胞系中LOxLl基因甲基化狀態(tài)與表達的研究摘要EB病毒(EpsteinBarrvirus，EBV)是公認的DNA致瘤病毒，現(xiàn)己確認EBV感染與部分胃癌發(fā)生密切相關，但發(fā)病機制有待進一步研究。EBV感染可誘導相關抑癌基因啟動子區(qū)呈高甲基化狀態(tài)，這被認為是引起EBV相關腫瘤抑制基因功能失活的重要機制之一。目的檢測并比較分析部分胃癌細胞系及EBV相關胃癌(EBVassociatedgastriccarcinomaE

2、BVaGC)和EBV陰性胃癌(EBVnegativedgastriccarcinomaEBVnGC)組織中LOXLl基因甲基化狀態(tài)及其轉錄表達，探討EBV感染對LOXLl基因啟動子區(qū)甲基化狀態(tài)及其轉錄表達的影響，為進一步研究LOXLl基因在EBVaGC發(fā)生中的作用機制提供實驗基礎。方法采用甲基化特異性PCR(Methylation—SpecificPCR，MSP)和亞硫酸氫鹽基因組測序法(Bisulfitegenomicsequenci

3、ng，BGS)檢測EBV陰性5fnISH性胃癌細胞系以及EBVaGC和EBVnGC組織中LOXLl基因啟動子區(qū)的甲基化狀態(tài)。用5氮雜2’脫氧胞苷(5Aza—CdR)對EBV陽性胃癌細胞系進行去甲基化處理，MSP及BGS檢測LOXLl基因啟動子區(qū)甲基化狀態(tài)的變化。采用實時熒光定量PCR(RealtimequantitativePCR，RealtimeqPCR)檢測比較EBV陰性胃癌細胞系、EBV陽性胃癌細胞系之間以及5AzaCdR作用前后

4、EBV陽性胃癌細胞系之間LOXLl基因轉錄表達水平的差異。結果①胃癌細胞系MSP結果顯示：3種EBV陽性胃癌細胞系SNU719，GT38，GT39和4種EBV陰性胃癌細胞系MKN45，SGC7901，HGC27，BGC823中LOXLl基因啟動子區(qū)均呈Mu型。②胃癌細胞系BGS結果顯示：3種EBV陽性胃癌細胞系中LOXLl基因啟動子區(qū)有大多數(shù)CpG位點呈現(xiàn)甲基化狀態(tài)，EBV陰性胃癌細胞系中未發(fā)現(xiàn)甲基化位點，EBV陽性胃癌細胞系甲基化程度

5、明顯高于EBV陰性胃癌細胞系。③胃癌組織MSP結果顯示：EBVaGC和EBVnGC組織中LOXLl基因啟動子區(qū)也均表現(xiàn)為MU型，但EBVaGC組織中LOXLl基因啟動子的甲基化程度較EBVnGC組織高。④部分胃癌組織BGS測序結果顯示：不同胃癌組織標本中LOXLl基因啟動子區(qū)的20個CpG位點呈現(xiàn)不同的甲基化狀態(tài)，甲基化程度存在一定的差異；其中EBVaGC組織中LOXLl基因啟動子區(qū)有更多的CpG位點呈現(xiàn)甲基化狀態(tài)，總體甲基化程度高于E

6、BVnGC組織。⑤5AzaCdR處理后EBV陽性胃癌細胞系MSPStudyofmethylationstatusandexpressionononLOXL1geneinEpsteinBarrvirus—associatedgastriccarcinomatiussesandgastriccarcinomacelllinesAbstractEpsteinBarrvirus(EBV)isknownasanimportantDNAtumorv

7、irusEBVinfectionISrelatedtogastriccarcinoma，butpathogenicmechanismofthatisnotwellunderstoodMethylationoftumorsuppressorgeneinducedbyEBVinfectionisknownasanimportantmechanismforthescilenceoftumorsuppressorgeneObjectiveThe

8、studyaimedtoexploretheinfluenceofEBVinfectiononLOXLlgenepromotermethylationstatusandtranscriptionalexpression，andfurthertoresearchtherolesofLOXL1playedintheoccurrenceofEBVassociatedcarcinomaMethodsThemethylationstausofLO

9、XLlgenepromoterinEBVpositiveand—negativegastriccancereelllinesandEBVaGCsandEBVnGCstissuewasdetectedbymethylation‘specificPCRandbisulfitegenomicsequencingThedemethylationlevelsofLOXL1genepromoterswasdetectedbybisulfitegen

10、omicsequencingandMSPandLOXLlgeneexpressionwasdetectedbytherealtimequantitativePCRbeforeandaftertreatmentwith5AzaCdRinEBVpositivecelllinesGT38andRajiResults@MSPresultshowedthemethylationstausofLOXLlgenepromoterwasallMUtyp

11、einEBVpositiveand—negativegastriccarcinomacelllines@Therewere20sitesofCpGislandsinLOXL1genepromoterBGSresultsshowedthatmostofCpGsitesonLOXL1genepromoterweremethylationinEBVpositivegastriccarcinomacelllines，andnomethylati

12、oninEBVnegativegastriccarcinomacelllines@MSPresultsshowedthatmethylationstausofLOXL1genepromoterwasMUtypeinEBVaGCsandEBVnGCsMethylationstatusofLOXLlgeneinEBVaGCtissuewassignificantlyhigherevidentthanEBVnGC④BGSresultsshow

13、edthatdifferentgastriccarcinomaspecimensrepresenteddifferentmethylationstausAveragedegreeofLOXL1genepromotermethylationinEBVaGCwassignificantlyhigherthanEBVnGCs⑤Aftertreatedwith5AzaCdR，theLOXL1genepromotermethylationinEB

14、Vpositivegastriccarcinomacelllineswaslowerthanbefore@LOXL1geneexpressionwasdifferentbetweenEBVnegativeandEBVpositivegastriccarcinomacelllines，itsexpressioninEBVnegativegastriccarcinomacelllinesis435timeshigherthaninEBVpo