二氧化碳氣體對離體子宮內(nèi)膜細胞增殖的影響.pdf

1、子宮內(nèi)膜異位癥(Endometriosis,EMs)是一種婦科常見病,在育齡婦女中的發(fā)病率高達10﹪-15﹪.病因至今尚未明確,其中兩個重要發(fā)病機制為:EMs患者在位內(nèi)膜的凋亡下調(diào),增殖上調(diào),凋亡及增殖平衡被打破;以及EMs患者腹腔局部缺乏足夠的免疫監(jiān)視.腹腔鏡手術是EMs診斷的金標準,能早期發(fā)現(xiàn)并更徹底地清除異位子宮內(nèi)膜的微小病灶,因此成為EMs患者的首選手術方式. 腹腔鏡手術因其創(chuàng)傷小,術后疼痛輕微,住院時間短,恢復快及其獨特的美容

2、效果等優(yōu)點倍受患者們青睞.隨著腹腔鏡手術應用的日益推廣及提高,惡性腫瘤也可選擇性地進行腹腔鏡下切除.但自1978年首次報道了惡性腫瘤腹腔鏡檢查術后發(fā)生切口轉(zhuǎn)移的病例以來,該問題逐漸引起學者們的重視.多項研究發(fā)現(xiàn),腹腔鏡手術中最常使用的二氧化碳(CO<,2>)氣腹技術對胃腸道某些腫瘤細胞有促進增殖,抑制凋亡作用,且增強了某些腫瘤細胞的侵襲性,從而促進了腫瘤細胞的轉(zhuǎn)移.這可能與CO<,2>氣腹引起的腹腔局部壓力升高,機體酸堿代謝紊亂、局部腹

3、膜結構改變,尤其是對腹腔局部免疫的顯著抑制等效應有關. 由于腹腔鏡在診斷和治療EMs中獨特的優(yōu)越性,目前其在臨床應用廣泛.而盡管EMs是一種良性病變,但異位子宮內(nèi)膜病灶卻表現(xiàn)出異常的種植、侵襲、甚至轉(zhuǎn)移等類似惡性腫瘤的生物學行為.這就使我們聯(lián)想到EMs術后難免殘留的異位內(nèi)膜細胞是否與部分胃腸道腫瘤細胞一樣,受到CO<,2>氣腹刺激而出現(xiàn)生長活躍現(xiàn)象呢.本課題結合當前對CO<,2>氣腹術的最新認識與EMs臨床表型的特點,通過原代培

4、養(yǎng)異位子宮內(nèi)膜細胞建立EMs體外模型,并基于EMs最新觀點"在位內(nèi)膜決定論",同時觀察CO<,2>氣體對異位及在位子宮內(nèi)膜細胞增殖的影響,旨在探索CO<,2>氣腹是否具有促進EMs灶增殖效應,從而參與EMs復發(fā). 材料和方法: 選擇本院經(jīng)病理明確診斷的卵巢型子宮內(nèi)膜異位癥患者(n=10),術后取其卵巢子宮內(nèi)膜異位囊腫壁,進行原代培養(yǎng);及病理明確診斷的進行子宮切除手術的子宮內(nèi)膜異位癥患者(n=19)、子宮肌瘤患者(n=12

5、),取其在位子宮內(nèi)膜,進行原代培養(yǎng).用二步法免疫組織化學鑒定所培養(yǎng)細胞.對體外培養(yǎng)的子宮內(nèi)膜細胞進行模擬腹腔鏡術中CO<,2>氣腹環(huán)境,用99.99﹪CO<,2>維持壓力15mmHg,處理90min.并設置對照組,與CO<,2>組同時放置于同一個培養(yǎng)箱內(nèi)90min,一個大氣壓下,恒溫37℃,5﹪的CO<,2>環(huán)境.處理后分別在24h、48h兩個時間點用流式細胞技術監(jiān)測其細胞周期分布,因異位內(nèi)膜細胞數(shù)量有限只取48h這個時間點進行檢測.且

6、在處理后立即測得其培養(yǎng)基內(nèi)pH值,并間隔lOmin監(jiān)測pH值,直至pH值恢復至7.0左右. 數(shù)據(jù)由均值±標準差(x±S)來表示,用X<'2>檢驗的統(tǒng)計學方法進行組間數(shù)據(jù)比較分析,檢驗水準α=0.05,雙側.所有實驗數(shù)據(jù)用SPSS11.0統(tǒng)計軟件包進行處理. 結果: 1.體外培養(yǎng)的對應月經(jīng)增生期異位子宮內(nèi)膜細胞予以模擬CO<,2>氣腹后48h,相比對照組G<,0>-G<,1>期細胞數(shù)有減少趨勢,S期、G<,2>-M

7、期細胞數(shù)有增多趨勢.體外培養(yǎng)的對應月經(jīng)分泌期異位子宮內(nèi)膜細胞予以模擬CO<,2>氣腹后48h,相比對照組G<,0>-G<,1>期細胞數(shù)有增多趨勢, S期、G<,2>-M期細胞數(shù)有減少趨勢,但差異均無統(tǒng)計學意義(p>0>05). 2.EMs在位子宮內(nèi)膜細胞及非EMs子宮內(nèi)膜細胞予以模擬CO<,2>氣腹后 24h 及48h兩時間點,相比對照組細胞周期分布無顯著變化(p>0.05). 3.EMs在位子宮內(nèi)膜細胞原代培養(yǎng)24h,

8、48h時G<,0>-G<,1>期細胞少于相應非EMs子宮內(nèi)膜細胞,S期及G<,2>-M期細胞多于相應的非EMs子宮內(nèi)膜細胞.但差異均無統(tǒng)計學意義(p>0.05).4.模擬CO<,2>氣腹處理后培養(yǎng)基pH降低至6.2左右,并于2h內(nèi)恢復至7.0左右.5.異位子宮內(nèi)膜細胞原代培養(yǎng)成功率為63.0﹪(29/43),在位子宮內(nèi)膜細胞的原代培養(yǎng)成功率高達96.9﹪(31/32).兩者比較有統(tǒng)計學意義(p<0.05). 結論:1.模擬CO<

9、,2>氣腹對體外培養(yǎng)的異位子宮內(nèi)膜細胞的增殖狀況短期內(nèi)無顯著影響,但存在促進月經(jīng)增生期異位子宮內(nèi)膜細胞增殖的趨勢,及抑制月經(jīng)分泌期異位子宮內(nèi)膜細胞增殖的趨勢.2.模擬CO<,2>氣腹對體外培養(yǎng)的EMs在位子宮內(nèi)膜細胞及非EMs子宮內(nèi)膜細胞的增殖狀況短期內(nèi)無顯著影響.但流式結果提示體外培養(yǎng)的EMs在位子宮內(nèi)膜細胞的增殖能力強于非EMs子宮內(nèi)膜細胞.3.CO<,2>氣腹在短時間內(nèi)降低了子宮內(nèi)膜細胞培養(yǎng)環(huán)境的pH值.4.異位子宮內(nèi)膜細胞原代培