AnnexinⅡ在乳腺癌中的表達以及對乳腺癌細胞增殖、侵襲的影響.pdf

1、目的：1、研究AnnexinⅡ在人乳腺癌組織以及人乳腺癌細胞株（MDA-MB-435s、MDA-MB-231、ZR-75-30、MCF-7）的表達情況，闡明AnnexinⅡ及s100A10的表達與人乳腺癌侵襲力的關系。2、探討AnnexinⅡ-siRNA沉默AnnexinⅡ基因表達對MDA-MB-435s細胞s100A10、c-Myc表達的影響。3、探討AnnexinⅡ-siRNA沉默AnnexinⅡ基因表達對MDA-MB-435s細胞

2、的增殖、細胞周期及侵襲力的影響。 方法： 1、采用免疫組織化學方法檢測正常人乳腺組織、導管原位癌及侵襲性導管癌組織中AnnexinⅡ及s100A10蛋白的表達情況；Millicell小室測定4株人乳腺癌細胞（MDA-MB-435s、MDA-MB-231、ZR-75-30、MCF-7）體外侵襲力；用RT-PCR、蛋白印跡技術分別檢測高侵襲性人乳腺癌細胞（MDA-MB-435s、MDA-MB-231、ZR-75-30）與低侵

3、襲性人乳腺癌細胞（MCF-7）中AnnexinⅡ與s100A10 mRNA和蛋白的表達情況。 2、體外化學合成針對AnnexinⅡ序列的特異性雙鏈小RNA；以高表達AnnexinⅡ的人乳腺癌細胞株MDA-MB-435s為研究對象，脂質體2000介導轉染MDA-MB-435s，采用熒光顯微鏡觀察轉染效率；分別收集對照組、實驗組細胞，實時熒光定量PCR、蛋白印跡和免疫熒光技術分別檢測干擾前后AnnexinⅡ、s100A10和c-My

4、c的變化。 3、采用MTT法、流式細胞術與Millicell小室分別檢測干擾前后細胞增殖活性、細胞周期及細胞侵襲力的變化。 結果： 1、免疫組化結果顯示正常乳腺組織上皮細胞未見AnnexinⅡ與s100A10表達；相反地，AnnexinⅡ與s100A10高表達在導管原位癌及侵襲性乳腺癌上皮細胞（P<0.01）；且AnnexinⅡ與s100A10表達水平與乳腺癌侵襲特性呈正相關。RT-PCR、蛋白印跡顯示高侵襲性人

5、乳腺癌細胞（MDA-MB-435s、MDA-MB-231、ZR-75-30）中AnnexinⅡ與s100A10 mRNA及蛋白水平顯著高于低侵襲性人乳腺癌細胞MCF-7（P<0.01）；且AnnexinⅡ與s100A10表達水平與乳腺癌細胞侵襲性呈正相關。激光共聚焦顯微鏡觀察顯示AnnexinⅡ與s100A10共定位于乳腺癌細胞胞漿與細胞膜；熒光強度與細胞侵襲力呈正相關；而兩者定位分布與侵襲力無關。 2、與空白對照組及陰性對照組

6、細胞比較，經AnnexinⅡ-siRNA處理的MDA-MB-435s細胞，AnnexinⅡ mRNA和蛋白的表達水平顯著降低（P<0.05）；且伴有s100A10與c-Myc蛋白水平明顯降低（P<0.05），但s100A10 mRNA水平無顯著性變化（P>0.05）。 3、與空白對照組與陰性對照組比較，經AnnexinⅡ-siRNA轉染24h的MDA-MB-435s細胞，增殖無明顯變化（P>0.05），而在轉染48～96h時，其

7、增殖能力明顯減低（P<0.05）；經AnnexinⅡ-siRNA轉染48h時，實驗組細胞G0/G1期明顯增加（P<0.05），S期細胞明顯減少（P<0.05）；實驗組細胞侵襲力明顯降低（P<0.05）。 結論： 1、AnnexinⅡ與s100A10高表達在乳腺癌組織及高侵襲性乳腺癌細胞中；且其表達水平與侵襲性呈正相關。 2、采用siRNA技術沉默MDA-MB-435s AnnexinⅡ后，細胞s100A10、c-