兔動脈粥樣硬化時血管內皮細胞膜超微結構和細胞黏附分子表達的動態(tài)變化及阿托伐他汀干預后的影響.pdf

1、目的：動脈粥樣硬化(atherosclerosis，AS)是危害人類健康的主要疾病之一，對于AS發(fā)病機制的研究一直是心血管疾病研究的熱點，以前被認為是一種單純脂質蓄積病變，新近研究證明，在AS病變發(fā)生發(fā)展直至最終血栓形成的各個階段，炎癥活動起著根本作用，而大量細胞黏附分子介導著這一作用。血管內皮細胞(vascularendothelialcell，VEC)與白細胞間相互作用是這一炎癥過程的始動因素，其在引發(fā)和擴大動脈炎癥反應中起了關鍵性

2、作用。在各種危險因素作用下內皮細胞受損、功能紊亂，分泌炎癥介質或調解白細胞在其表面的黏附而具備潛在的炎癥作用。研究內皮細胞受損情況及黏附分子的表達在防治AS具有非常重要的意義。本研究通過建立兔高脂模型，采用免疫組化的方法檢測在早期AS形成中不同時間段血管內皮細胞黏附分子(vascularcellularadhesionmolecule-1,VCAM-1)和血小板內皮細胞黏附分子(plateletendothelialcelladhesi

3、onmolecule-1，PECAM-1)的動態(tài)表達，并應用原子力顯微鏡(atomicforcemicroscope，AFM)觀察VEC膜的超微結構的動態(tài)演變，闡明VEC和黏附分子在AS形成中的作用。以及應用阿托伐他汀(atorvastatin)干預后的影響，來探討他汀類藥在抗AS中的非降脂作用的可能機制。 方法：新西蘭純種雄性大白兔88只，按清潔級動物分籠喂養(yǎng)，體重1.8-2.5Kg，適應性喂養(yǎng)一周后，隨機分為3組，即正常對照

4、組(C組)24只：喂以普通顆粒兔飼料;AS模型組(AS組)32只：喂以高脂飲食；atorvastatin組(D組)32只：高脂飲食喂養(yǎng)，同時予atorvastatin(4mg/kg.d)灌胃。分別于實驗開始及第2、4、6、8周末5個時間點，記錄兔體重。于實驗開始隨機抽取10只兔，空腹抽取耳沿靜脈血行有關化驗，并于實驗的2、4、6、8周末隨機處死兔6-8只，抽取下腔靜脈血，測定血脂、轉氨酶、磷酸肌酸激酶，同時取胸主動脈弓處血管制作石蠟切片

5、，分別進行常規(guī)VCAM-1和PECAM-1免疫組化染色，并用圖像分析；取胸主動脈中段標本平鋪固定于載玻片上，應用AFM觀察內皮細胞超微結構的變化。 結果： 1大體標本肉眼觀:C組兔主動脈壁薄，有韌性，不易拉斷，內膜呈透明色，無斑塊形成。AS組隨時間延長血管壁逐漸變厚，脆性增加，易拉斷，內膜呈灰白色，明顯斑塊形成，第8周有粥樣斑塊潰瘍糜爛改變。D組動脈壁較AS組薄，略厚于C組，可見較少局限性的斑塊形成，但隨時間延長逐漸好轉

6、，各期均明顯好于同期AS組。 2C組血脂在實驗前后無明顯變化，而AS組和D組血漿血脂水平包括膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL)在2、4、6、8周末時較實驗前及C組均已明顯升高；同期D組各項血脂水平均明顯低于AS組(均P＜0.001)，高于C組(均P＜0.001)。 3實驗前后及三組間血漿轉氨酶、磷酸肌酸激酶水平無明顯差別(P＞0.05)。 4在C組胸主動脈VCAM-1無表達，PECAM-1在

7、血管內皮細胞間可見少量表達。AS組胸主動脈VCAM-1免疫反應呈陽性、PECAM-1免疫反應陽性范圍及程度均高于C組。D組胸主動脈VCAM-1、PECAM-1免疫反應陽性范圍及程度均低于同期AS組，至第8周幾乎無表達。 5AFM下VEC的超微結構變化：(1)50μm大范圍掃描：C組VEC呈梭形，排列規(guī)整，其長軸與血液流動方向一致；AS組隨時間不同內皮細胞發(fā)生了動態(tài)改變，細胞形態(tài)變成球形、三角形、不規(guī)則形等多種形態(tài)、體積變大腫脹，

8、排列不規(guī)則，極相紊亂。(2)1μm及500nm掃描可見：C組VEC膜蛋白由圓形、橢圓形等大小較一致的顆粒樣隆起構成，隆起結構光滑、飽滿，排列疏密均勻一致，各隆起間界限分明。AS組細胞膜蛋白由三角形、多角形、不規(guī)則形等大小不一的隆起組成，隆起結構起伏較大，排列疏密明顯不均，隆起表面凹凸不平，各隆起間界限隨時間推移逐漸變得模糊不清，偶見孔洞。8周末細胞膜多由不規(guī)則形大小相差極為懸殊的隆起組成；隆起間有許多孔洞。D組隨時間推移VEC形態(tài)、排列

9、及膜蛋白結構更接近C組。 6500nm水平下對VEC膜粗糙度分析：AS組隨時間延長粗糙度逐漸增加，與C組和D組比較均有統(tǒng)計學差異(P＜0.01)。D組細胞膜粗糙度高于C組(P＜0.01)。 結論： 1AFM可以清楚直觀地觀察到AS時VEC的超微結構及三維成像情況。 2在AS形成中，VEC的超微結構隨時間的推移表現出一個動態(tài)變化，提示VEC受損可能是AS發(fā)生發(fā)展中的關鍵環(huán)節(jié)。VEC膜粗糙度的改變可能更易于白