干細胞融合誘導EMT的實驗研究.pdf

1、目的：腫瘤轉(zhuǎn)移過程有多種因素參與，上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)可能是促進其轉(zhuǎn)移的因素之一，細胞融合在EMT中的作用值得重視。本研究體外培養(yǎng)正常胃粘膜上皮細胞系(GES-1)及GES-1與臍帶來源間充質(zhì)干細胞(CM-MSCs)的融合細胞，探索細胞融合參與上皮細胞EMT的可能。
　　方法：體外培養(yǎng)GES-1、CM-MSCs及融合細胞，觀察細胞形態(tài)及生長特性。劃痕實驗、Franswell實驗檢測融合細胞遷移侵襲能力。噻唑藍比色分析法(MTT)

2、分析融合細胞增殖活性。免疫細胞化學染色法分析三種細胞E-cadherin、N-cadherin、Vimentin的表達情況。RT-PCR技術檢測三種細胞EMT相關基因Slug、Twist的mRNA的轉(zhuǎn)錄水平。
　　結(jié)果：融合細胞與GES-1相比，細胞核增大，胞漿減少。融合細胞增殖活性較CM-MSCs及GES-1明顯增強；獲得向基質(zhì)膠侵襲的能力，遷移與侵襲能力增強。融合細胞間質(zhì)性標記蛋白N-cadherin、Vimentin的染色強

3、度分別為4.067±1.387和5.067±1.907，GES-1分別為2.333±1.234和2.067±0.961。融合細胞與GES-1相比N-cadherin、Vimentin的表達顯著升高，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。融合細胞Twist、Slug因子的mRNA轉(zhuǎn)錄水平分別為0.0122±0.0060和0.0065±0.0022，GES-1分別為0.0013±0.0007和0.0010±0.0003。融合細胞與GES-1相比

4、Twist、Slug因子的mRNA轉(zhuǎn)錄水平顯著升高，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。
　　結(jié)論：間充質(zhì)干細胞和上皮細胞融合產(chǎn)生的融合細胞核增大，胞漿減少，增殖活性較親代CM-MSCs及GES-1明顯增強，遷移與侵襲能力增強。融合細胞間質(zhì)性標記蛋白N-cadherin、Vimentin的表達，EMT相關轉(zhuǎn)錄因子Twist、Slug因子的mRNA轉(zhuǎn)錄水平較上皮細胞上調(diào)，表明問充質(zhì)干細胞和上皮細胞融合誘導子代細胞發(fā)生EMT，導致子代細